主权项 |
一种用于确定固定在固体载体上的单一多核苷酸的核苷酸序列的方法,包括以下步骤:(i)使所述多核苷酸与至少一种测试互补碱基和/或至少一种探针接触,所述探针包括可与所述多核苷酸中的一个或多个碱基互补的部分,珠粒连接至所述至少一种测试互补碱基和/或至少一种探针或者结合对的第一结合伴侣连接至所述至少一种测试互补碱基和/或至少一种探针,并且当所述测试互补碱基和/或所述测试互补探针的部分与所述多核苷酸中的所述一个或多个碱基互补时,所述测试互补碱基和/或探针共价结合至所述多核苷酸;(ii)当结合伴侣连接至所述测试互补碱基和/或探针时,通过所述结合对,将连接至所述结合对的第二结合伴侣的珠粒结合至所述测试互补碱基和/或探针,所述第一结合伴侣连接至所述测试互补碱基和/或探针;(iii)可选地,使用至少一种不同的测试互补碱基和/或探针,重复步骤(i)、或步骤(i)与步骤(ii),直到与所述一个或多个碱基互补的测试碱基和/或其部分与所述一个或多个碱基互补的测试探针已结合至所述多核苷酸;(iv)通过确定步骤(i)至步骤(iii)期间连接至所述测试互补碱基和/或探针的所述珠粒是否结合至所述多核苷酸,来确定哪种测试互补碱基和/或所述测试探针的哪个互补部分结合至所述多核苷酸的所述一个或多个碱基,从而识别所述多核苷酸的所述一个或多个碱基;以及(v)如果在步骤(iv)期间没有除去珠粒,则除去所述珠粒;其中,步骤(i)至步骤(v)的每一个循环进行一次或多次,并且在每一个循环中识别所述序列的一个或多个碱基。 |