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一种从单粒稻米胚乳中提取高质量基因组DNA的方法，其特征在于包括以下步骤：1） 去除稻壳、种皮、果皮、胚的单粒稻米，经牛皮纸包裹后，用研磨棒砸碎装入1.5 mL离心管；2） 加入800 μL洗涤液于摇床上120 rpm振荡5 min去除多糖，4,000 rpm离心2 min，丢弃上清液后收集沉淀；3） 在沉淀中加入600 μL DNA提取缓冲液，漩涡振荡使沉淀悬浮并上下颠倒混匀，而后置于65°C水浴45 min以裂解细胞；4） 抽提：待上述混合物冷至室温后加入600 μL苯酚：氯仿：异戊醇体积比为25：24：1的苯酚‑氯仿‑异戊醇混合液，于摇床上120 rpm振荡5‑10 min至乳白色，12,000 rpm离心5 min，定量吸取500 μL上清液至另一新离心管，再加入500 μL氯仿：异戊醇体积比为24：1的氯仿‑异戊醇混合液，于摇床上120 rpm振荡5‑10 min至乳白色，12,000 rpm离心5 min后，定量吸取400 μL上清液至另一新离心管；沉淀：加入40 μL pH=5.2的5 M醋酸钾溶液和293 μL异丙醇混匀，于4°C放置2 h，12,000 rpm离心10 min，丢弃上清液，收集DNA沉淀；润洗：加入1 mL 体积比为70%的乙醇后轻弹管底使沉淀悬浮，于摇床上120 rpm振荡2 min，7,000 rpm离心3 min，丢弃上清液；干燥：室温下干燥沉淀；溶解：加入100 μL去离子水溶解沉淀，获得DNA粗提液；5） 向DNA粗提液中加入核糖核酸酶A至终浓度0.1 mg/mL，37°C温浴30 min去除RNA，再加入氯仿：异戊醇体积比为24：1的氯仿‑异戊醇混合液抽提并重复上述的沉淀、润洗、干燥、溶解步骤后，即获得DNA溶液； 其中所述的洗涤液其成分包括：100mM pH=8.0的Tris‑HCl，50mM EDTA，0.35M山梨醇Sorbitol，质量比为1%的聚乙烯吡咯烷酮PVP‑40；所述的DNA提取缓冲液其成分包括：质量比2%CTAB，100mM Tris‑HCl，25mM EDTA，15M NaCl，质量比1%PVP‑40，0.1mg/mL 蛋白酶K，质量比0.5%NP‑40，质量比0.5% Tween‑20。 |
