丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒及其制备方法

摘要

本发明属于免疫诊断技术领域，具体涉及一种微粒子化学发光法丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒及其制备方法。试剂盒由测抗HCV磁微粒、测抗HCV示踪结合物、测抗HCV样品稀释液、质控品组成，本发明还公开了该诊断试剂盒的制备方法，其采用的是微粒子化学发光免疫分析技术，比ELISA具有更高的灵敏度和特异性，适合于临床HCV的辅助诊断和献血员筛查，填补了国内微粒子化学发光法检测HCV抗体诊断试剂生产的空白。

主权项

一种丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒的制备方法，所述试剂盒包括测抗HCV磁微粒、测抗HCV示踪结合物、测抗HCV样品稀释液、质控品；所述测抗HCV磁微粒为标记有含盖丙肝病毒Core、NS3、NS4、NS5基因片段的特异性重组抗原的磁性微粒子；测抗HCV示踪结合物为标记有特异性抗人IgG的异鲁米诺；测抗HCV样品稀释液为含牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液；质控品溯源至国家参考品，包括一低含量HCV抗体的血清和一高含量HCV抗体的血清；其特征是：具体制备方法包括以下步骤：（1）制备测抗HCV磁微粒  将带羧基磁微粒与EDC的重量比为1：2，磁微粒与含盖丙肝病毒Core、NS3、NS4、NS5基因片段的特异性重组抗原的比例为每毫克磁微粒标记20μg的抗原，在室温下进行标记，标记时间1小时，标记后采用甘氨酸封闭EDC的多余的位点，使之浓度达到25mM，反应30分钟，洗涤三次，加入含1%牛血清白蛋白的0.01MPBS，2‑8℃保存；（2）制备测抗HCV示踪结合物  特异性抗人IgG与异鲁米诺的标记，反应体系为：戊二醛最佳使用浓度为1.25%，特异性抗人IgG与异鲁米诺的最佳重量比为2：1，在室温反应1.5小时，用pH7.2‑7.4的0.01M PBS进行透析进行透析，透析后加入等体积甘油‑20℃存放；（3）制备测抗HCV样品稀释液  磷酸二氢钠 0.39g/L、磷酸氢二钠 2.68g/L、氯化钠 8.50g/L、牛血清白蛋白10g/L、硫柳汞 1.0g/L，按上述配方配制稀释液；（4）质控品溯源至国家参考品，包括质控品1和2，其中质控品1为低含量HCV抗体的血清，质控品2为高含量HCV抗体的血清。