大豆检疫性真菌病害多重实时荧光PCR检测方法及试剂盒

摘要

本发明涉及一种同时检测大豆疫病菌、大豆拟茎点霉种子腐烂病菌、大豆南方茎溃疡病菌、大豆北方茎溃疡病菌四种中一种或多种大豆真菌病害的简单、快速、特异、灵敏的实时荧光PCR检测方法及其试剂盒。适合于口岸检验检疫、农业生产、植物保护等部门使用。

主权项

一种对大豆真菌病害实时荧光PCR检测的方法，包括如下步骤：步骤一：设计检测选自大豆疫病菌、大豆拟茎点霉种子腐烂病菌、大豆南方茎溃疡病菌、大豆北方茎溃疡病菌中两种以上大豆真菌病害的引物和寡核苷酸探针；步骤二：将步骤一中设计的两种以上大豆真菌病害的引物和寡核苷酸探针同时进行实时荧光PCR反应；步骤三：根据荧光信号类型判定检测样品的大豆真菌病害；所述大豆疫病菌的一对引物是：P.SOJAE‑1F：5’‑TGGTTTGGGTCCTCCTCGT‑3’SEQ ID NO:1P.SOJAE‑1R：5’‑TGTGCGAGCCTAGACATCCA‑3’SEQ ID NO:2，所述大豆拟茎点霉种子腐烂病菌的一对引物是：PL‑1F：5’‑AGCATCACTTTCATTCCCACTT‑3’SEQ ID NO:3PL‑1R：5’‑GGCTGTGTAGAAAGAGTCAGCAT‑3’SEQ ID NO:4，所述大豆南方茎溃疡病菌的一对引物是：DPM‑1F：5’‑CCAGAAACCCTTTGTGAACTC‑3’SEQ ID NO:5DPM‑1R：5’‑TGTTTTTTGCTCAGAGTTTCG‑3’SEQ ID NO:6，所述大豆北方茎溃疡病菌的一对引物是：DPC‑1F：5’‑GCTTGGTGTTGGGGCACT‑3’SEQ ID NO:7DPC‑1R：5’‑TACGCTCGGGGTCCTGG‑3’SEQ ID NO:8；所述大豆疫病菌的寡核苷酸探针是：P.SOJAE‑1Q：5’‑SAT‑ACCCATTCTTAAATACTGAA‑SAT‑3’SEQ IDNO:9，所述大豆拟茎点霉种子腐烂病菌的寡核苷酸探针是：PL‑Q：5’‑URA‑TCTGCTCCAGAGAGCTT‑URA‑3’SEQ ID NO:10，所述大豆南方茎溃疡病菌的寡核苷酸探针是：DPM‑1Q：5’‑JUP‑ACAAGAGTTGGCTTGGC‑JUP‑3’SEQ ID NO:11，所述大豆北方茎溃疡病菌的寡核苷酸探针是：DPC‑1Q：5’‑MAR‑TGAAATTCATTGGCGAGCT‑MAR‑3’SEQ ID NO:12。