α-L-鼠李糖苷酶在生物转化芦丁定向合成异槲皮苷中的应用

摘要

α-L-鼠李糖苷酶在生物转化芦丁定向合成异槲皮苷中的应用。以α-L-鼠李糖苷酶的粗酶制剂或固定化酶制剂用于催化水解芦丁定向生物合成异槲皮苷，不仅催化剂来源广泛、制备容易、成本低廉，而且酶制剂稳定性高、易于保存、催化效率和专一性高。因此，使用α-L-鼠李糖苷酶可大幅度降低槲皮素的生产成本，酶催化转化率高，且产物专一。

主权项

α‑L‑鼠李糖苷酶在生物转化芦丁定向合成异槲皮苷中的应用，其特征在于：（1）菌种的选择：选择黑曲霉CGMCC No.2588（Aspergillus niger LJ‑1）作为产α‑L‑鼠李糖苷酶的菌种；（2）制备α‑L‑鼠李糖苷酶的粗酶液：产酶培养基配方按重量比：磷酸氢二钾1.0％、磷酸二氢钾0.5％、硫酸铵0.5％、硝酸钠0.05％、硫酸镁0.05％、硫酸亚铁0.01％、硫酸锌0.01％、pH 6.0；将菌种接种于α‑L‑鼠李糖苷酶产酶培养基中，在35℃，摇床转速160rpm的条件下，产酶发酵72h，然后将所有发酵物在5000rpm的转速下离心20min，收集上清液即获得α‑L‑鼠李糖苷酶的粗酶液；（3）α‑L‑鼠李糖苷酶催化水解芦丁定向生物合成异槲皮苷：A、α‑L‑鼠李糖苷酶的游离酶催化水解芦丁定向生物合成异槲皮苷：将α‑L‑鼠李糖苷酶溶液按20g/L的加入量加入浓度为0.09g/L的芦丁底物溶液中，pH 7，进行酶促水解反应，反应温度40℃，反应时间36h，反应结束，HPLC检测水解产物异槲皮苷的摩尔转化率为27％；或，B、α‑L‑鼠李糖苷酶的固定化酶催化水解芦丁定向生物合成异槲皮苷：配制作固定化酶用的0.2％（重量）海藻酸钠溶液，加入α‑L‑鼠李糖苷酶10g/L，混合均匀后，滴入交联剂溶液中固化4h，制成大小均匀的球状固定化颗粒，洗涤后备用；将固定化α‑L‑鼠李糖苷酶装填于柱状反应器，用泵输送浓度为0.09g/L、pH 7的芦丁底物溶液经过固定床，进行酶促水解反应，反应温度45℃，反应时间48h，反应结束，HPLC检测水解产物异槲皮苷的摩尔转化率为31％；（4）异槲皮苷的提取纯化：将步骤（3）获得的转化液浓缩，调节其pH至7，异槲皮苷沉淀析出；复溶后，重结晶，获得高纯度异槲皮苷。