一株高产菊粉酶真菌的制备方法

摘要

本发明所属微生物种类开发技术领域。本发明涉及一株高产菊粉酶真菌的制备方法。在滨海盐碱地菊芋生长的根际土壤，加入适量菊粉诱菌15-20天；取土壤10g于内置90毫升无菌蒸馏水与适量玻璃珠的250ml锥形瓶中，30℃，180r/min摇床20分钟；取稀释液适量涂布于筛选培养基，30℃培养4-6天；初筛后所得的菌株经多次纯化得纯种A1；A1进行发酵培养，提取菌株的总DNA送上海生工生物技术公司测序；将测得的核苷酸序列输入GenBank数据库，进行Blast比对，获取与试验菌18S rDNA基因序列相似度高的菌种，采用ClustalW进行多序列比对；结合形态鉴定和18S rDNA序列分析比对，得A1菌株为囊状青霉Eladia saccula SA1201。该菌株菊粉酶活力较高，为11.8395u/mL，适合于进一步优化培养和制备基因工程菌。

主权项

本发明涉及一株产菊粉酶真菌的制备，其特征在产菊粉酶真菌的制备方法，包括以下过程：步骤(一)：在滨海盐碱地菊芋生长的根际土壤，加入适量菊粉诱菌15‑20天；步骤(二)：取步骤(一)土壤10g于内置90毫升无菌蒸馏水与适量玻璃珠的250ml锥形瓶中，30℃，180r/min摇床20分钟；步骤(三)：取步骤(二)稀释液0.2‑0.4毫升涂布于筛选培养基，30℃培养4‑6天；步骤(四)：将步骤(三)分离、初筛后所得的菌株利用平板划线方法分离纯化；步骤(五)：重复步骤(四)3‑4次，得到纯种A1；步骤(六)：挑取步骤(五)中的菌株接种于发酵培养基进行发酵培养，30℃摇振培养4‑6d，提取菌株的总DNA作为模板，利用通用引物进行PCR反应，纯化；步骤(七)：将步骤(六)纯化后的PCR产物送上海生工生物技术公司测序。将测得的核苷酸序列输入GenBank数据库，进行Blast比对，获取与试验菌18S rDNA基因序列相似度高的菌种。采用ClustalW进行多序列比对；步骤(八)：鉴定后的菌种保存备用。