发明名称 |
一种用于表征外周调节性T细胞抑制活性的特征细胞群的检测方法及其应用 |
摘要 |
本发明涉及医药领域,特别是涉及一种用于表征外周调节性T细胞抑制活性的特征细胞群的检测方法及其应用,更为具体的说是涉及一种用于表征外周调节性T细胞抑制活性的特征细胞群的检测方法及其在用于制备调节性T细胞抑制活性检验试剂盒中的应用、以及在用于制备筛选胰腺早期病变靶标的试剂盒中的应用。否定了外周免疫调节细胞群与它应具备的调节功能间存在矛盾,免疫调节细胞的数量高低与它应该发挥的作用无关的业内普遍理论,找到了一组对调节性T细胞抑制活性具有表征价值的细胞群,并进一步公开了相应的细胞群检测方法,从而对调节性T细胞抑制活性,以及筛选胰腺早期病变靶标奠定了重要的基础。 |
申请公布号 |
CN103235135A |
申请公布日期 |
2013.08.07 |
申请号 |
CN201310150133.2 |
申请日期 |
2013.04.26 |
申请人 |
史其新 |
发明人 |
史其新 |
分类号 |
G01N33/66(2006.01)I |
主分类号 |
G01N33/66(2006.01)I |
代理机构 |
南京众联专利代理有限公司 32206 |
代理人 |
张慧清 |
主权项 |
一种用于表征外周调节性T细胞抑制活性的特征细胞群的检测方法,其特征是该方法包括以下步骤:步骤1)将待测样本处理,形成单细胞悬液;步骤2)特征细胞群的抗体染色:将上述单细胞悬液分别与荧光抗体CD3、CD4、CD69混合;步骤3)混合液以流式细胞洗液调匀,加入细胞破膜裂解液,混匀冰上孵育30分钟,再用细胞破膜辅液,充分混匀后离心,去上清;步骤4)新鲜配制脱氧核糖核酸酶液,加入到步骤4)中所得沉淀中,混匀后孵育60分钟,再用细胞破膜辅液,充分混匀后离心,去上清,步骤5)加入抗体Fc阻断剂,充分作用20分钟;步骤6)分别加入检测标记调节细胞表位的转录因子(FoxP3)和脱氧核糖核酸复制(BrdU)的抗体; 所述的BrdU、FoxP3分别采用不同荧光标记,分取1.5μl抗体冰上孵育30分钟,再用细胞破膜辅液200μl,洗涤细胞悬液,充分混匀后离心,去上清;步骤7)流式细胞仪检测:加入流式细胞洗液500ml,充分混匀后离心,去上清,加入流式细胞洗液,流式细胞仪上机检测。 |
地址 |
210019 江苏省南京市奥体大街69号新城科技园05幢新城国际企业孵化器 |