一种重组鸭β-防御素-2蛋白的生产方法

摘要

一种重组鸭β-防御素-2蛋白的生产方法，其特征在于，含鸭β-防御素-2的酵母重组转化子体外诱导表达过程：（1）阳性酵母转化子的诱导表达：结果显示诱导培养后的菌体蛋白与未诱导的对照组相比，有一条大小为4.32kD非常明显的蛋白表达条带，经超高效液相色谱-电喷雾串联质谱鉴定，与目的蛋白氨基酸序列相吻合，表明目的基因已经得到表达即重组鸭β-防御素-2蛋白已经生产出来。本发明与已有技术相比，具有抗菌促生长活性，适合于在畜牧生产中进行应用，而且生产成本低、生产效率高的优点。

主权项

一种重组鸭β‑防御素‑2蛋白的生产方法，其特征在于， 含鸭β‑防御素‑2的酵母重组转化子体外诱导表达过程：（1）阳性酵母转化子的诱导表达：挑取经鉴定的阳性酵母转化子接种于3 mL YPD 液体中，30℃、250 r/min振摇培养过夜；再接种于50 mL BMGY体培养基中，BMGY包含1wt%酵母抽提物、2 wt %蛋白胨，1mol/L的 pH为6.0的磷酸钾缓冲液、1.34wt%无酵母氮源、4×10‑5wt %生物素、1%wt甘油，30℃振荡培养24 h，至菌体OD600nm达到2～6 时离心弃去上清，加入25 mL BMMY 液体培养基，BMMY 液体培养基包含1wt%酵母抽提物、2 wt %蛋白胨、1mol/L的pH为6.0的磷酸钾缓冲液、1.34 wt %无酵母氮源、4×10‑5 wt %生物素、0.5 wt %甲醇，连续诱导培养72 h，在诱导过程中，每间隔24h加入100％甲醇使其终浓度为0.5%，培养至72h收集样品，离心，取上清进行Tricine‑SDS‑PAGE电泳，结果显示诱导培养后的菌体蛋白与未诱导的对照组相比，有一条大小为4.32kD非常明显的蛋白表达条带，经超高效液相色谱‑电喷雾串联质谱鉴定，与目的蛋白氨基酸序列相吻合，表明目的基因已经得到表达即重组鸭β‑防御素‑2蛋白已经生产出来。