一种新型柴胡皂苷糖苷酶及其制备方法和应用

摘要

本发明涉及医药领域，提供了一种新型柴胡皂苷糖苷酶及其制备方法和应用，该酶是能水解柴胡皂苷A、D、B1、B2的3-O上的β-(1→3)-葡萄糖苷键和β-6-脱氧半乳糖糖苷键的新型柴胡皂苷糖苷酶，其酶是由细菌、链霉菌、黑曲霉菌、米曲菌、酵母菌、担子菌发酵，经离子交换树脂柱和/或蛋白制备色谱仪分离提纯，得到在SDS电泳上单一带的纯柴胡皂苷糖苷酶；本发明还提供其酶与柴胡皂苷单体反应，制备相应单糖基柴胡皂苷和苷元方法；与柴胡中提取的混合总皂苷反应，制备单糖基柴胡皂苷和苷元的混合总皂苷；与柴胡药材反应，制备单糖基柴胡皂苷和苷元的混合皂苷含量高的柴胡药材。

主权项

一种柴胡皂苷糖苷酶的酶解代谢产物的制备方法，包括以下步骤：(1)微生物发酵方法：采用液态发酵法或固态发酵法，其中所述液态发酵法是指产酶时加入相当于培养基0.01％‑1％的柴胡皂苷诱导物、或者相当于培养基0.1％‑3％柴胡提取物，发酵培养2‑8天、离心除渣，得到粗酶液；固态发酵法是加入培养基1％‑30％柴胡，培养2‑8天，用缓冲液浸出、离心除渣得粗酶液；所述微生物为链霉菌；(2)向粗酶液中加入60‑75％饱和硫酸铵沉淀酶蛋白，收集沉淀再用原酶液的1/5‑1/10的浓度0.001‑0.5M，pH为3‑10的缓冲液溶解，离心除渣得到酶的浓缩液；(3)粗酶浓缩液还经离子交换树脂柱和/或蛋白制备色谱仪分离提纯，得到在SDS电泳上单一带的纯柴胡皂苷糖苷酶，所述柴胡皂苷糖苷酶的蛋白质分子量为3.0‑9.0万；(4)上述柴胡皂苷糖苷酶与0.01％‑10％底物的pH3～9缓冲液混合在4～75℃，反应4～40小时后，提取酶解代谢产物。