固相多肽合成Exenatide的制备方法

摘要

本发明提供了一种固相多肽合成Exenatide的制备方法：以Rink Amide树脂、RinkAmide AM树脂或Rink Amide MBHA树脂为起始原料，依次连接具有Fmoc保护基团的氨基酸，获得保护的三十九肽树脂，其间依次脱去Fmoc-保护基团，用缩合剂，进行接肽反应，得保护的三十九肽树脂后，同步进行脱侧链保护基团及切肽，获得Exenatide粗品，并经C18或C8柱进行分离纯化，再经冷冻干燥，获得产品(包括：醋酸盐、三氟醋酸盐等医学上可用的盐及游离碱)。本发明的方法，工艺稳定，原辅材料来源方便，生产周期短，生产成本低，三废少，收率高，质量稳定，生产成本低，收率高。

主权项

一种固相多肽合成Exenatide的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）制备Fmoc‑Ser(tBu)‑树脂称取Rink Amide MBHA树脂100克，装入SHYM‑25多肽合成仪中，用1000mlDMF浸泡30分钟，加入Fmoc‑Ser(tBu)‑OH 58g，HBTU 58g，HOBT 21g，用1000ml接肽试剂溶解，25℃反应1小时，抽干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤数次，抽干；（2）制备Fmoc‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂在步骤（1）的Fmoc‑Ser(tBu)‑树脂中，加入脱帽试剂800ml，25℃反应30分钟，抽干，用DMF、甲醇、DMF各洗涤数次，抽干，加入Fmoc‑Pro‑OH 52g、HBTU 58g、HOBT 21g，用1000ml接肽试剂溶解混合物，25℃反应1小时，抽干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤数次抽干，获得Fmoc‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂；（3）制备Fmoc‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂在步骤（2）的Fmoc‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂中，加入脱帽试剂 800ml，25℃反应30分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入Fmoc‑Pro‑OH 52g、HBTU 58g，HOBT 21g，用1000ml接肽试剂溶解混合物，25℃反应1小时，抽干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤数次，抽干，获得Fmoc‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂；Fmoc‑Pro‑OH的摩尔数为树脂的2~5倍；（4）制备Fmoc‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂在步骤（3）的Fmoc‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂中，加入800ml脱帽试剂，25℃反应30分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入Fmoc‑Pro‑OH 52g、HBTU 58g，HOBT 21g，用1000ml接肽试剂溶解的混合物，25℃反应1小时，抽干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤数次，抽干，获得Fmoc‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂；Fmoc‑Pro‑OH的摩尔数为树脂的2~5倍；（5）制备Fmoc‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂在步骤（4）的Fmoc‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂中，加入800ml脱帽试剂，反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入Fmoc‑Ala‑OH 48g、HBTU 58g，HOBT 21g，用1000ml接肽试剂溶解混合物，25℃反应1小时，抽干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤数次，抽干，获得Fmoc‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂；Fmoc‑Ala‑OH的摩尔数为树脂的2~5倍；（6）制备Fmoc‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂在步骤（5）的Fmoc‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂中，加入800ml脱帽试剂，反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入Fmoc‑Gly‑OH 46g、HBTU 58g，HOBT 21g，用1000ml接肽试剂溶解混合物，25℃反应1小时，抽干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤数次，抽干，获得Fmoc‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂；（7）制备Fmoc‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂在步骤（6）的Fmoc‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂中，加入800ml脱帽试剂，反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入Fmoc‑Ser(tBu)‑OH 58g、HBTU 58g，HOBT 21g，用1000ml接肽试剂溶解混合物，25℃反应1小时，抽干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤数次，抽干，抽干，获得Fmoc‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂；（8）制备Fmoc‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂在步骤（7）的Fmoc‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂中，加入800ml脱帽试剂，反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入Fmoc‑Ser(tBu)‑OH 58g、HBTU 58g，HOBT 21g，用1000ml接肽试剂溶解混合物，25℃反应1小时，抽干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤数次，抽干，抽干，获得Fmoc‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑ Pro‑Ser(tBu)‑树脂；（9）制备Fmoc‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂在步骤（8）的Fmoc‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂中，加入800ml脱帽试剂，反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入Fmoc‑Pro‑OH 52g、HBTU 58g，HOBT 21g，用1000ml接肽试剂溶解混合物，25℃反应1小时，抽干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤数次，抽干，获得Fmoc‑Pro‑Ser(tBu) ‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑ Pro ‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂；（10）制备Fmoc‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂在步骤（9）的Fmoc‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂中，加入800ml脱帽试剂，反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入Fmoc‑Gly‑OH 46g、HBTU 58g，HOBT 21g，用1000ml接肽试剂溶解混合物，25℃反应1小时，抽干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤数次，抽干，获得Fmoc‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑ Pro‑Ser(tBu)‑树脂；（11）制备Fmoc‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂在步骤（10）的Fmoc‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly ‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂中，加入800ml脱帽试剂，反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入Fmoc‑Gly‑OH 46g、HBTU 58g，HOBT 21g，用1000ml接肽试剂溶解混合物，25℃反应1小时，抽干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤数次，抽干，获得Fmoc‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala ‑Pro‑Pro ‑Pro‑Ser (tBu)‑树脂；（12）制备Fmoc‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑ Ser (tBu)‑树脂在步骤（11）的Fmoc‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu) ‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂中，加入800ml脱帽试剂，反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入Fmoc‑Asn(Trt)‑OH 90g、HBTU 58g，HOBT 21g，用1000ml接肽试剂溶解混合物，25℃反应1小时，抽干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤数次，抽干，获得Fmoc‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly ‑Pro ‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑ Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂；（13）制备Fmoc‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro –Pro ‑Ser(tBu)‑树脂在步骤（12）的Fmoc‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑ Ser(tBu)‑树脂中，加入800ml脱帽试剂，反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入Fmoc‑Lys(Boc)‑OH 72g、HBTU 58g，HOBT 21g，用1000ml接肽试剂溶解混合物，25℃反应1小时，抽干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤数次，抽干，获得Fmoc‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂；（14）制备Fmoc‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro ‑Pro ‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂在步骤（13）的Fmoc‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu) ‑Gly‑Ala‑Pro ‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂中，加入800ml脱帽试剂，反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入Fmoc‑Leu‑OH 54g、HBTU 58g，HOBT 21g，用1000ml接肽试剂溶解混合物，25℃反应1小时，抽干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤数次，抽干，获得Fmoc‑Leu‑ Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro ‑Pro‑Ser (tBu)‑树脂；（15）制备Fmoc‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑ Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂在步骤（14）的Fmoc‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly ‑Ala ‑Pro‑Pro ‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂中，加入800ml脱帽试剂，反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入Fmoc‑Trp(Boc)‑OH 64g、HBTU  58g，HOBT 21g，用1000ml接肽试剂溶解混合物，25℃反应1小时，抽干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤数次，抽干，获得Fmoc‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro ‑Pro ‑ Ser(tBu)‑树脂；（16）制备Fmoc‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser (tBu) ‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂在步骤（15）的Fmoc‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu) ‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂中，加入800ml脱帽试剂，反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入Fmoc‑Glu(OtBu)‑OH 64g、HBTU 58g，HOBT 21g，用1000ml接肽试剂溶解混合物，25℃反应1小时，抽干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤数次，抽干，获得Fmoc‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑ Ala ‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂；（17）制备Fmoc‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑ Ser (tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂在步骤（16）的Fmoc‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser (tBu) ‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂中，加入800ml脱帽试剂，反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入Fmoc‑Ile‑OH 54g、HBTU 58g，HOBT 21g，用1000ml接肽试剂溶解混合物，25℃反应1小时，抽干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤数次，抽干，获得Fmoc‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑ Gly ‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂；（18）制备Fmoc‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro ‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂在步骤（17）的Fmoc‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly –Pro ‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂中，加入800ml脱帽试剂，反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入Fmoc‑Phe‑OH 58g、HBTU 58g，HOBT 21g，用1000ml接肽试剂溶解混合物，25℃反应1小时，抽干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤数次，抽干，获得Fmoc‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑ Asn(Trt)‑Gly‑ Gly‑Pro‑Ser (tBu) ‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂；（19）制备Fmoc‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑ Pro ‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂在步骤（18）的Fmoc‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt) ‑Gly‑Gly‑ Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂中，加入800ml脱帽试剂，反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入Fmoc‑Leu‑OH 54g、HBTU 58g，HOBT 21g，用1000ml接肽试剂溶解混合物，25℃反应1小时，抽干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤数次，抽干，获得Fmoc‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑ Gly‑Pro‑ Ser(tBu) ‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂；（20）制备Fmoc‑Arg(Pbf)‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly ‑Gly ‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂在步骤（19）的Fmoc‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt) ‑Gly ‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂中，加入800ml脱帽试剂，反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入Fmoc‑Arg(Pbf)‑OH 98g、HBTU 58g，HOBT 21g，用1000ml接肽试剂溶解混合物，25℃反应1小时，抽干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤数次，抽干，获得Fmoc‑Arg(Pbf)‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑ Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro ‑ Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂；（21）制备Fmoc‑Val‑Arg(Pbf)‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt) ‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂在步骤（20）的Fmoc‑Arg(Pbf)‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc) ‑Asn (Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂中，加入800ml脱帽试剂，反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入Fmoc‑Val‑OH 52g、HBTU 58g，HOBT   21g，用1000ml接肽试剂溶解混合物，25℃反应1小时，抽干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤数次，抽干，获得Fmoc‑Val‑Arg(Pbf)‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑ Lys(Boc) ‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑ Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂；（22）制备Fmoc‑Ala‑Val‑Arg(Pbf)‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑ Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂在步骤（21）的Fmoc‑Val‑Arg(Pbf)‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys (Boc) ‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂中，加入800ml脱帽试剂，反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入Fmoc‑Ala‑OH 48g、HBTU 58g，HOBT 21g，用1000ml接肽试剂溶解混合物，25℃反应1小时，抽干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤数次，抽干，获得Fmoc‑Ala‑Val‑Arg(Pbf)‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp (Boc)‑Leu‑Lys (Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro ‑Pro‑Pro‑ Ser (tBu)‑树脂；（23）制备Fmoc‑Glu(OtBu)‑Ala‑Val‑Arg(Pbf)‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑ Lys(Boc) ‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂在步骤（22）的Fmoc‑Ala‑Val‑Arg(Pbf)‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc) ‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂中，加入800ml脱帽试剂，反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入Fmoc‑Glu(OtBu)‑OH 64g、HBTU 58g，HOBT 21g，用1000ml接肽试剂溶解混合物，25℃反应1小时，抽干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤数次，抽干，获得Fmoc‑Glu(OtBu)‑Ala‑Val‑Arg(Pbf)‑ Leu‑Phe‑Ile ‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc) ‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑ Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂；（24）制备Fmoc‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑Val‑Arg(Pbf)‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc) ‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂在步骤（23）的Fmoc‑Glu(OtBu)‑Ala‑Val‑Arg(Pbf)‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu) ‑Trp(Boc) ‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂中，加入800ml脱帽试剂，反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入Fmoc‑Glu(OtBu)‑OH 64g、HBTU 58g，HOBT 21g，用1000ml接肽试剂溶解混合物，25℃反应1小时，抽干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤数次，抽干，获得Fmoc‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu) ‑Ala‑Val‑Arg(Pbf)‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂；（25）制备Fmoc‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑Val‑Arg(Pbf)‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu (OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂在步骤（24）的Fmoc‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑Val‑Arg(Pbf)‑ Leu‑Phe ‑Ile‑Glu(OtBu) ‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂中，加入800ml脱帽试剂，反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入Fmoc‑Glu(OtBu)‑OH 64g、HBTU 58g，HOBT 21g，用1000ml接肽试剂溶解混合物，25℃反应1小时，抽干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤数次，抽干，获得Fmoc‑Glu(OtBu) ‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑Val‑Arg(Pbf)‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑ Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂；（26）制备Fmoc‑Met‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑Val‑Arg(Pbf)‑Leu‑Phe‑Ile –Glu (OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂在步骤（25）的Fmoc‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑Val‑Arg(Pbf)‑Leu‑Phe ‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂中，加入800ml脱帽试剂，反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入Fmoc‑Met‑OH 56g、HBTU 58g，HOBT 21g，用1000ml接肽试剂溶解混合物，25℃反应1小时，抽干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤数次，抽干，获得Fmoc‑Met ‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu) ‑Glu(OtBu)‑Ala‑Val‑Arg(Pbf) ‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu ‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑ Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂；（27）制备Fmoc‑Gln(Trt)‑Met‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑Val‑Arg(Pbf)‑Leu ‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂在步骤（26）的Fmoc‑Met‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑Val‑Arg(Pbf)‑Leu ‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂中，加入800ml脱帽试剂，反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入Fmoc‑Gln(Trt)‑OH 92g、HBTU 58g，HOBT 21g，用1000ml接肽试剂溶解混合物，25℃反应1小时，抽干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤数次，抽干，获得Fmoc‑Gln(Trt) ‑Met‑Glu(OtBu) ‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑Val‑Arg(Pbf)‑Leu‑Phe‑Ile ‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc) ‑Leu‑Lys(Boc) ‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑ Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala ‑Pro ‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂；（28）制备Fmoc‑Lys(Boc)‑Gln(Trt)‑Met‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑Val‑ Arg (Pbf)‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂在步骤（27）的Fmoc‑Gln(Trt)‑Met‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑Val‑Arg(Pbf) ‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂中，加入800ml脱帽试剂，反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入Fmoc‑Lys(Boc)‑OH72g、HBTU 58g，HOBT 21g，用1000ml接肽试剂溶解混合物，25℃反应1小时，抽干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤数次，抽干，获得Fmoc‑Lys(Boc)‑Gln(Trt)‑Met‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑Val‑Arg(Pbf)‑Leu‑ Phe ‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑ Pro ‑ Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂；（29）制备Fmoc‑Ser(tBu)‑Lys(Boc)‑Gln(Trt)‑Met‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑ Val‑Arg(Pbf)‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu) ‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂在步骤（28）的Fmoc‑Lys(Boc)‑Gln(Trt)‑Met‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala ‑Val‑Arg(Pbf)‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂中，加入800ml脱帽试剂，反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入Fmoc‑Ser(tBu)‑OH 58g、HBTU 58g，HOBT 21g，用1000ml接肽试剂溶解混合物，25℃反应1小时，抽干，分别用DMF洗涤数次，抽干，获得Fmoc‑Ser(tBu)‑Lys(Boc) ‑Gln(Trt)‑Met‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑Val‑Arg(Pbf)‑ Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂；（30）制备Fmoc‑Leu‑Ser(tBu)‑Lys(Boc)‑Gln(Trt)‑Met‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑ Ala‑Val‑Arg(Pbf)‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂在步骤（29）的Fmoc‑Ser(tBu)‑Lys(Boc)‑Gln(Trt)‑Met‑Glu(OtBu)‑Glu (OtBu)‑Glu(OtBu) ‑Ala‑Val‑Arg(Pbf)‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂中，加入800ml脱帽试剂，反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入Fmoc‑Leu‑OH 54g、HBTU 58g，HOBT 21g，用1000ml接肽试剂溶解混合物，25℃反应1小时，抽干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤数次，抽干，获得Fmoc‑Leu‑Ser(tBu)‑Lys(Boc)‑Gln(Trt)‑Met‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑Val ‑Arg(Pbf) ‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑ Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂；（31）制备Fmoc‑Asp(OtBu)‑Leu‑Ser(tBu)‑Lys(Boc)‑Gln(Trt)‑Met‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu) ‑Glu(OtBu)‑Ala‑Val‑Arg(Pbf)‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂在步骤（30）的Fmoc‑Leu‑Ser(tBu)‑Lys(Boc)‑Gln(Trt)‑Met‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑ Glu(OtBu)‑Ala‑Val‑Arg(Pbf)‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂中，加入800ml脱帽试剂，反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入Fmoc‑Asp(OtBu)‑OH 62g、HBTU 58g，HOBT 21g，用1000ml接肽试剂溶解混合物，25℃反应1小时，抽干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤数次，抽干，获得Fmoc‑Asp(OtBu)‑Leu‑Ser(tBu)‑Lys(Boc)‑Gln(Trt) ‑Met‑Glu(OtBu)‑ Glu (OtBu)‑ Glu (OtBu)‑Ala‑Val‑Arg(Pbf)‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑ Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂；（32）制备Fmoc‑Ser(tBu)‑Asp(OtBu)‑Leu‑Ser(tBu)‑Lys(Boc)‑Gln(Trt)‑Met‑Glu(OtBu) ‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑Val‑Arg(Pbf)‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂在步骤（31）的Fmoc‑Asp(OtBu)‑Leu‑Ser(tBu)‑Lys(Boc)‑Gln(Trt)‑Met‑Glu(OtBu) ‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑Val‑Arg(Pbf)‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂中，加入800ml脱帽试剂，反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入Fmoc‑Ser(tBu)‑OH 58g、HBTU 58g，HOBT 21g，用1000ml接肽试剂溶解混合物，25℃反应1小时，抽干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤数次，抽干，获得Fmoc‑Ser(tBu)‑Asp(OtBu)‑Leu‑Ser(tBu) ‑Lys(Boc) ‑Gln(Trt)‑Met ‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑Val‑Arg(Pbf)‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑ Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂；（33）制备Fmoc‑Thr(tBu)‑Ser(tBu)‑Asp(OtBu)‑Leu‑Ser(tBu)‑Lys(Boc)‑Gln(Trt)‑Met‑ Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑Val‑Arg(Pbf)‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂在步骤（32）的Fmoc‑Ser(tBu)‑Asp(OtBu)‑Leu‑Ser(tBu)‑Lys(Boc)‑Gln(Trt)‑Met ‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑Val‑Arg(Pbf)‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂中，加入800ml脱帽试剂，反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入Fmoc‑Thr(tBu)‑OH 60g、HBTU 58g，HOBT 21g，用1000ml接肽试剂溶解混合物，25℃反应1小时，抽干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤数次，抽干，获得Fmoc‑Thr(tBu)‑Ser(tBu)‑Asp(OtBu)‑ Leu‑Ser(tBu) ‑Lys(Boc)‑Gln(Trt)‑Met‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑Val‑Arg(Pbf)‑ Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂；（34）制备Fmoc‑Phe‑Thr(tBu)‑Ser(tBu)‑Asp(OtBu)‑Leu‑Ser(tBu)‑Lys(Boc)‑Gln(Trt)‑Met ‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑Val‑Arg(Pbf)‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂在步骤（33）的Fmoc‑Thr(tBu)‑Ser(tBu)‑Asp(OtBu)‑Leu‑Ser(tBu)‑Lys (Boc)‑Gln(Trt) ‑Met‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑Val‑Arg(Pbf)‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂中，加入800ml脱帽试剂，反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入Fmoc‑Phe‑OH 58g、HBTU 58g，HOBT 21g，用1000ml接肽试剂溶解混合物，25℃反应1小时，抽干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤数次，抽干，获得Fmoc‑Phe‑Thr(tBu)‑Ser(tBu)‑Asp(OtBu)‑Leu ‑Ser(tBu)‑Lys(Boc)‑Gln(Trt) ‑Met‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑Val‑Arg(Pbf)‑ Leu‑ Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂；（35）制备Fmoc‑Thr(tBu)‑Phe‑Thr(tBu)‑Ser(tBu)‑Asp(OtBu)‑Leu‑Ser(tBu)‑Lys(Boc)‑ Gln (Trt)‑Met‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑Val‑Arg(Pbf)‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂在步骤（34）的Fmoc‑Phe‑Thr(tBu)‑Ser(tBu)‑Asp(OtBu)‑Leu‑Ser(tBu)‑Lys(Boc)‑ Gln(Trt)‑Met‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑Val‑Arg(Pbf)‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂中，加入800ml脱帽试剂，反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入Fmoc‑Thr (tBu)‑OH 60g、HBTU 58g，HOBT 21g，用1000ml接肽试剂溶解混合物，25℃反应1小时，抽干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤数次，抽干，获得Fmoc‑Thr(tBu) ‑Phe‑Thr(tBu)‑Ser(tBu) ‑Asp(OtBu) ‑Leu‑Ser(tBu)‑Lys(Boc)‑Gln(Trt)‑Met‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑ Val‑Arg(Pbf)‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂；（36）制备Fmoc‑Gly‑Thr(tBu)‑Phe‑Thr(tBu)‑Ser(tBu)‑Asp(OtBu)‑Leu‑Ser(tBu)‑Lys(Boc) ‑Gln(Trt)‑Met‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑Val‑Arg(Pbf)‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂在步骤（35）的Fmoc‑Thr(tBu)‑Phe‑Thr(tBu)‑Ser(tBu)‑Asp(OtBu)‑Leu‑Ser (tBu)‑ Lys(Boc)‑Gln(Trt)‑Met‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑Val‑Arg(Pbf)‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂中，加入800ml脱帽试剂，反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入Fmoc‑Gly‑OH 46g、HBTU 58g，HOBT 21g，用1000ml接肽试剂溶解混合物，25℃反应1小时，抽干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤数次，抽干，获得Fmoc‑Gly‑Thr(tBu) ‑Phe‑Thr (tBu)‑Ser(tBu)‑Asp(OtBu)‑Leu‑Ser(tBu)‑Lys(Boc)‑Gln(Trt)‑Met‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑ Glu (OtBu)‑Ala‑Val‑Arg(Pbf)‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂；（37）制备Fmoc‑Glu(OtBu)‑Gly‑Thr(tBu)‑Phe‑Thr(tBu)‑Ser(tBu)‑Asp(OtBu)‑Leu‑Ser(tBu) ‑Lys(Boc)‑Gln(Trt)‑Met‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑Val‑Arg(Pbf)‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂在步骤（36）的Fmoc‑Gly‑Thr(tBu)‑Phe‑Thr(tBu)‑Ser(tBu)‑Asp(OtBu)‑ Leu‑Ser(tBu)‑ Lys(Boc)‑Gln(Trt)‑Met‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑Val‑Arg(Pbf)‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂中，加入800ml脱帽试剂，反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入Fmoc‑Glu(OtBu)‑OH 64g、HBTU 58g，HOBT 21g，用1000ml接肽试剂溶解混合物，25℃反应1小时，抽干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤数次，抽干，获得Fmoc‑Glu(OtBu)‑Gly ‑Thr(tBu)‑Phe‑Thr(tBu)‑Ser(tBu)‑Asp(OtBu)‑Leu‑Ser(tBu)‑Lys(Boc)‑Gln(Trt)‑Met‑ Glu (OtBu)‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑Val‑Arg(Pbf)‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂；（38）制备Fmoc‑Gly‑Glu(OtBu)‑Gly‑Thr(tBu)‑Phe‑Thr(tBu)‑Ser(tBu)‑Asp (OtBu)‑Leu ‑Ser(tBu)‑Lys(Boc)‑Gln(Trt)‑Met‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑Val‑Arg(Pbf)‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂在步骤（37）的Fmoc‑Glu(OtBu)‑Gly‑Thr(tBu)‑Phe‑Thr(tBu)‑Ser(tBu)‑Asp(OtBu) ‑Leu‑Ser(tBu)‑Lys(Boc)‑Gln(Trt)‑Met‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑Val‑Arg(Pbf)‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂中，加入800ml脱帽试剂，反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入Fmoc‑Gly‑OH 46g、HBTU 58g，HOBT 21g，用1000ml接肽试剂溶解混合物，25℃反应1小时，抽干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤数次，抽干，获得Fmoc‑Gly‑Glu(OtBu)‑Gly ‑Thr(tBu)‑Phe‑Thr(tBu)‑Ser(tBu)‑Asp(OtBu)‑Leu‑Ser(tBu)‑Lys (Boc) ‑Gln(Trt)‑Met‑Glu (OtBu)‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑Val‑Arg(Pbf)‑Leu‑Phe‑ Ile‑ Glu(OtBu) ‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys (Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑ Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂；（39）制备Fmoc‑His(Trt)‑Gly‑Glu(OtBu)‑Gly‑Thr(tBu)‑Phe‑Thr(tBu)‑Ser(tBu) ‑Asp(OtBu) ‑Leu‑Ser(tBu)‑Lys(Boc)‑Gln(Trt)‑Met‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑Val‑Arg(Pbf)‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂在步骤（38）的Fmoc‑Gly‑Glu(OtBu)‑Gly‑Thr(tBu)‑Phe‑Thr(tBu)‑Ser(tBu)‑Asp(OtBu) ‑Leu‑Ser(tBu)‑Lys(Boc)‑Gln(Trt)‑Met‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑Val‑Arg(Pbf)‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Trp(Boc)‑Leu‑Lys(Boc)‑Asn(Trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑树脂中，加入预冷至0℃的切肽试剂：TFA/EDT/H2O/TIS＝1260ml/56ml/35ml/14ml，25℃反应3小时，减压除溶剂后，加入1500ml乙醚沉淀，收集沉淀物，用乙醚洗，在室温，置干燥器中，P2O5存在下减压干燥12小时，获得切肽后的Exenatide粗品，100g；将Exenatide粗品溶于重量浓度为5%乙酸中，过滤，滤液经C18柱纯化，流动相：0.2M醋酸盐缓冲液∶乙腈为7.5∶2.5，体积比；流速为350ml/min；检测波长为：280nm；用液相色谱仪跟踪收集所需要的流出液，样品峰合并后去盐，冻干，获得产品12.2g，总收率为9.7%；所说的接肽试剂为：NMM：DMF=1：5~15，体积比；所说的脱帽试剂为：PIP：DMF=1：2~5，体积比。