一种布鲁氏菌抗体免疫胶体金检测试纸条及其制备方法

摘要

本发明公开一种布鲁氏菌抗体免疫胶体金检测试纸条，用金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)标记胶体金制成本发明的胶体金抗体检测试纸条的金胶垫。L7/L12蛋白是布鲁氏菌高特异性、免疫原性蛋白。从牛布鲁氏菌基因组中克隆出L7/L12基因，把它连接到pET-28a上，构建成原核表达重组质粒，把这个质粒转化到大肠杆菌中，表达出L7/L12蛋白，蛋白纯化后，以它为抗原包被硝酸纤维膜，作为检测线(T线)，同金胶垫一起装备成本发明的免疫胶体金试纸条。本发明试纸条可用于检测动物血清中的布鲁氏菌抗体，具有特异性强，灵敏度高、稳定性好、方便、快捷的特点，对布鲁氏菌的监测、诊断、净化和控制具有重要意义和实际应用价值。

主权项

一种布鲁氏菌抗体免疫胶体金检测试纸条，特征在于：以金黄色葡萄球菌A蛋白（SPA）标记胶体金制作金标垫，以布鲁氏菌L7/L12蛋白包被硝酸纤维膜作为检测抗原线（T），用兔抗牛IgG或兔抗羊IgG作为质控线（C）；所述的胶体金试纸条制备方法，主要包括以下步骤：（1）用SPA标记胶体金，制备成胶体金探针，把它喷在玻璃纤维膜上制成胶体金垫；（2）设计一对引物，以牛布鲁氏菌基因组为模板，用PCR扩增、并纯化出L7/L12基因；（3）把步骤（2）中所得基因连接到质粒pET‑28a的Nde I和Sal I位置上，构建成原核表达重组质粒，转化到大肠杆菌中，表达出L7/L12蛋白；用His‑Trp纯出L7/L12蛋白；（4）用(3)中的纯化的L7/L12蛋白为诊断抗原包被硝酸纤维膜作为本发明胶体金试纸条的检测线（T线）, 检测牛时用兔抗牛IgG作为质控线（C线），检测羊时用兔抗羊IgG作为质控线（C线）；（5）将样品垫、结合垫、硝酸纤维膜、吸水滤纸按从上到下依次固定于PVC板上，制备成检测试纸条。