环化循环置换荧光蛋白及其制备方法和用途

摘要

本发明公开了一种环化循环置换荧光蛋白及其制备方法和用途，属于生物技术。本发明由融合基因编码表达，并迅速由蛋白内含子催化自发地环化而成，被相应的蛋白水解酶水解后产生荧光，因此可作为蛋白水解酶活性指示剂。这样设计的本发明，以环化循环置换荧光蛋白为蛋白水解酶的底物，以反应后产生的荧光为指标，不需要破坏样品，便可快速、准确地检测样品中的蛋白水解酶的活性，灵敏、直观、便捷、省时。不仅可以实现实时监测细胞内蛋白水解酶的活性，还可方便地检测体外蛋白水解酶的活性。由于荧光方法方便检测和操作，因此，本发明中的环化循环置换荧光蛋白及其表达基因能制备成检测水解蛋白酶活性的试剂，或试剂盒。

主权项

一种环化循环置换荧光蛋白，其特征在于：所述蛋白是环状蛋白，由编码融合循环置换荧光蛋白的基因表达，并迅速由其中的蛋白内含子催化自发环化而成，以荧光蛋白mVenus为模板的融合基因编码表达的VPAI，含蛋白水解酶的识别位点DEVDG，经蛋白水解酶Caspase‑3水解后产生黄色荧光，成为蛋白水解酶活性指示剂，VPAI的氨基酸序列如序列表中VPAI序列所示。