微生物来源的抗氧化剂制备方法

摘要

微生物来源的抗氧化剂制备方法，它涉及抗氧化剂制备方法。它解决了现有提取方法得到的菌产抗氧化剂存在杂质较多，抗氧化活性低的问题。方法：制青霉JTLR-1的培养物；培养物反复冻融并研碎后，制无水提取物；制无水提取物乙酸乙酯溶液并上样于硅胶填料，弃去乙酸乙酯溶液；乙酸乙酯溶液和无水乙醇混合后洗脱硅胶，弃去洗脱液；继续洗脱硅胶，收集洗脱液，减压除去溶剂即完成。本发明中的制备方法可以除去较多杂质，且得到的抗氧化剂比现有提取方法浓缩了至少6倍以上，可见抗氧化活性高。

主权项

微生物来源的抗氧化剂制备方法，其特征在于微生物来源的抗氧化剂制备方法按以下步骤进行：一、将1~2环青霉JTLR‑1接种于PDA固体培养基，在28℃下培养2天，然后转接于装有200mL察氏培养基的500mL三角瓶中，在28℃、180r/min条件下摇瓶培养7天，收集液体发酵培养物；二、液体发酵培养物过滤后取固形菌丝，然后用液氮反复冻融并研碎后，加入蒸馏水形成过40目标准筛的流体，再用正己烷萃取，直至正己烷萃取液无色后取水层加入萃取溶剂进行萃取，萃取三次，合并三次萃取液，然后加入无水Na2SO4除水，过滤去除固形物后得到提取液，再在25~50℃下减压除去溶剂，得到无水提取物；三、取1g无水提取物溶解于1~100ml乙酸乙酯，得无水提取物乙酸乙酯溶液，然后上样于硅胶填料，上样流速为0.1~10mL/min，弃去流经硅胶填料的乙酸乙酯溶液；四、按体积比20:100将乙酸乙酯溶液和无水乙醇混合，然后洗脱硅胶，洗脱流速为0.1~100mL/min，洗脱体积为硅胶体积的10~20倍，弃去洗脱液；五、按体积比20~100:100将乙酸乙酯溶液和无水乙醇混合，继续洗脱硅胶，洗脱流速为0.1~100mL/min，洗脱体积为硅胶体积的10~20倍，收集洗脱液，在25~50℃下减压除去溶剂，得到具抗氧化作用物质的提取物，即完成微生物来源的抗氧化剂制备；其中步骤二中蒸馏水的加入量为每1g研碎后物质加1~20ml蒸馏水；步骤二中水层与萃取溶液的体积比为1:1；步骤三中上样的量按无水提取物质量计，无水提取物与硅胶的质量比为1:1~100，硅胶的粒径为5μm~2mm；步骤一中所述的青霉JTLR‑1，分类命名为青霉Penicillium sp，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2011年3月21日，保藏编号为CGMCC No.4701。