| 摘要 |
Способ диагностики метапневмовируса птиц, заключающийся в выделении из клинического материала РНК, проведении на ней обратной транскрипции и ПЦР в реальном времени, отличающийся тем, что после выделения из образца РНК проводят обратную транскрипцию при помощи набора SileksM для получения кДНК с использованием праймеров F: TCAATGCATCAGCACAAGG, R: TCCCCACTAATTGCAGCTTC, далее на полученной кДНК (1 мкл) проводят ПЦР в объеме 20 мкл, сожержащем по 3 мкмоль каждого из нуклеотидов, по 5 пмолей праймеров (F: TCAATGCATCAGCACAAGG, R: TCCCCACTAATTGCAGCTTC) и зонда FAM-CAGTAGCACTAGATGACTACAGCAAACRAG-DHQ1 0,2 единицы активности, Taq полимеразы, буфер для полимеразы, катионы Mg2+ в концентрации 0,2 мМ, ПЦР поводят в амплификаторе для ПЦР в реальном времени, условия реакции: 95°С - 5 мин - 1 цикл, 35 циклов (95°С - 18 с, 55°С - 30 с, 72°С - 30 с), 72°С - 5 мин - 1 цикл, детектируют рост флуоресценции по каналу FАМ, который свидетельствует о наличии в образце кДНК, специфичной для метапневмовируса птиц. |
