单链寡聚脱氧核苷酸突变载体

摘要

本发明涉及到预定的遗传变化在活体细胞的靶基因中的引入，该引入通过引入编码预定遗传变化的寡聚脱氧核苷酸来完成。该寡聚脱氧核苷酸在动物、植物和细菌细胞中有效。对于极大的提高了该寡聚脱氧核苷酸在细菌中的效能的特异的末端修饰进行了描述。令人惊奇的，未经修饰的寡聚脱氧核苷酸在包括肝细胞在内的哺乳类细胞中与经修饰的核苷酸同样有效，并且可能与杂体寡聚核苷酸同样有效或者更为有效，该杂体寡聚核苷酸由脱氧核苷酸和2’-0-甲基核苷酸的混合物组成。

主权项

用于获得哺乳动物细胞的方法，该哺乳动物细胞在靶基因上含有预定的遗传变化，该方法包括：(a)提供培养基中的哺乳动物细胞群体；(b)将下述的组合物加入培养基；并且(c)对群体中的具有该预定的遗传变化的细胞进行鉴定，其中，所述哺乳动物细胞不是胚胎干细胞所述的组合物用于在哺乳类或鸟类细胞的靶基因上产生预定的遗传变化，该组合物含有：(a)单链寡聚脱氧核苷酸，该寡聚脱氧核苷酸具有3’末端核苷酸，5’末端核苷酸，具有至少31个脱氧核苷酸和不超过59个脱氧核苷酸，并且具有含有至少两个区域的序列，每个区域至少8个脱氧核苷酸，这些区域分别与靶基因上的至少两个区域相同，这些区域总共长至少24个核苷酸，并且这些区域被该靶基因的序列中或者该寡聚脱氧核苷酸的序列中或同时两者的序列中的至少一个核苷酸所分隔，以便该寡聚脱氧核苷酸的序列与靶基因的序列不相同；以及(b)大分子载体，这些载体选自(i)水核心的脂类囊泡，其中该水核心含有该单链寡聚脱氧核苷酸，(ii)脂类纳米球体，该球体含有该单链寡聚脱氧核苷酸的亲脂性盐，以及(iii)多聚阳离子，其具有500道尔顿至1.3Md的平均分子量，其中该多聚阳离子同该单链寡聚脱氧核苷酸形成盐。