高产S-腺苷蛋氨酸的巴斯德毕赤酵母菌株的构建方法

摘要

本发明公开了一种高产S-腺苷蛋氨酸的巴斯德毕赤酵母菌株的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：从酿酒酵母基因组中PCR扩增出S-腺苷蛋氨酸合成酶基因sam2，连接至质粒pPIC9K中，得到真核表达载体pPIC9K-sam2，然后将其转化到巴斯德毕赤酵母；从毕赤酵母基因组中PCR扩增出胱硫醚β合成酶基因cbs，将其亚克隆至载体pMD19T中，得到重组载体T-cbs；将博莱霉素抗性基因zeocin导入重组载体T-cbs的胱硫醚β合成酶基因，得到cbs基因敲除质粒T-C-Z，酶切后获得cbs基因敲除片段C-Z；将片段C-Z转化至步骤1所得的包含pPIC9K-sam2的巴斯德毕赤酵母，得到敲除cbs基因又强化sam2基因的高产S-腺苷蛋氨酸的巴斯德毕赤酵母菌株。

主权项

高产S‑腺苷蛋氨酸的巴斯德毕赤酵母菌株的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）从酿酒酵母基因组中PCR扩增出S‑腺苷蛋氨酸合成酶基因sam2，连接至质粒pPIC9K中，得到真核表达载体pPIC9K‑sam2，然后将其转化到巴斯德毕赤酵母；（2）从毕赤酵母基因组中PCR扩增出胱硫醚β合成酶基因cbs，将其亚克隆至载体pMD19T中，得到重组载体T‑cbs；将博莱霉素抗性基因zeocin导入重组载体T‑cbs的胱硫醚β合成酶基因，得到cbs基因敲除质粒T‑C‑Z，酶切后获得cbs基因敲除片段C‑Z；（3）将片段C‑Z转化至步骤1 所得的包含pPIC9K‑sam2的巴斯德毕赤酵母，得到敲除cbs基因又强化sam2基因的高产S‑腺苷蛋氨酸的巴斯德毕赤酵母菌株。