微波辅助反胶束分离纯化芸豆凝集素的方法

摘要

微波辅助反胶束分离纯化芸豆凝集素的方法，涉及一种凝集素的分离纯化方法。为了解决芸豆凝集素分离纯化倍率低、成本高、工艺多、时间长的问题，本发明提出的微波辅助反胶束分离纯化芸豆凝集素的方法为直接从芸豆凝集素水提液中分离纯化凝集素，包括前萃取过程和反萃取过程。本发明在微波辅助作用下，使芸豆中水溶性蛋白迅速溶入水提液，大大提高了溶解度，缩短了浸提时间。本发明基于液-液萃取原理，提高了萃取的选择性，可实现芸豆凝集素的高效前萃取和反萃取。应用反胶束萃取技术只需前萃取和反萃取两步即可达到较好的分离纯化效果，步骤简单，操作方便，与微波辅助集合可极大缩短前处理时间，节约成本。

主权项

一种微波辅助反胶束分离纯化芸豆凝集素的方法，其特征在于所述方法为直接从芸豆凝集素水提液中分离纯化凝集素，包括前萃取过程和反萃取过程，具体步骤如下：（1）芸豆凝集素水提液制备：芸豆磨粉，过40～100目筛，溶于5～50体积倍水溶液中，10～60℃下微波辅助浸提5～60min，功率为150～800W，浸提后经8000～15000rpm、4℃离心10～20min，取上清液；（2）反胶束溶液配制：将表面活性剂加入到有机溶剂中，搅拌至表面活性剂完全溶解，加入一定的量的水，使体系Wo值处于15～35范围内，静置所得透明溶液即为反胶束溶液，其浓度为15～300mM；（3）前萃取过程：调节芸豆凝集素水提液pH值为4.0～10.0，离子强度为20～200mM，将芸豆凝集素水提液与反胶束溶液按照体积比为1:1～1:50的比例混合5～40min后，1500～5000rpm离心分层，取上层有机相；（4）反萃取过程：将上述上层有机相与具有一定离子强度的反萃缓冲溶液按照体积比为1:1～1:50的比例混合5～40min后，1500～5000rpm离心分层，取下层水相，经除盐、冷冻干燥，得到分离纯化后的芸豆凝集素。