不饱和脂肪酸-Cu/Zn-超氧化物歧化酶修饰物及其制备

摘要

本发明公开了一类不饱和脂肪酸-Cu/Zn-超氧化物歧化酶修饰物及其制备，所述Cu/Zn-超氧化物歧化酶上的自由氨基与不饱和脂肪酸上的羧基以酰胺键的形式结合，一个Cu/Zn-超氧化物歧化酶分子结合不多于20个不饱和脂肪酸分子；所述的不饱和脂肪酸的碳链长度为16～26。所述的制备方法是：采用二氯亚砜活化法或者N-羟基琥珀酰亚胺活化法活化不饱和脂肪酸上的羧基，得到不饱和脂肪酸的活化产物；将Cu/Zn-超氧化物歧化酶与不饱和脂肪酸的活化产物加入pH6.0～9.0缓冲溶液中，在0～30℃下搅拌反应，制得目标产物。本发明所述的不饱和脂肪酸-Cu/Zn-超氧化物歧化酶修饰物，充分发挥不饱和脂肪酸和Cu/Zn-SOD的协同作用，提高了Cu/Zn-超氧化物歧化酶的稳定性，降低其免疫原性，具有更好的使用效果和使用范围。

主权项

一类不饱和脂肪酸‑Cu/Zn‑超氧化物歧化酶修饰物，其特征是Cu/Zn‑超氧化物歧化酶上的自由氨基与不饱和脂肪酸上的羧基以酰胺键的形式结合，一个Cu/Zn‑超氧化物歧化酶分子结合不多于20个不饱和脂肪酸分子；所述的不饱和脂肪酸的碳链长度为16～26；所述的不饱和脂肪酸‑Cu/Zn‑超氧化物歧化酶修饰物通过如下方法制备：采用二氯亚砜活化法或者N‑羟基琥珀酰亚胺活化法活化不饱和脂肪酸上的羧基，得到不饱和脂肪酸的活化产物；将Cu/Zn‑超氧化物歧化酶与不饱和脂肪酸的活化产物加入pH 6.0～9.0缓冲溶液中，在0～30℃下搅拌反应，反应完全后采用预冷丙酮沉淀和凝胶柱层析法分离不饱和脂肪酸‑Cu/Zn‑超氧化物歧化酶修饰物，再经过冷冻干燥制得粉末状不饱和脂肪酸‑Cu/Zn‑超氧化物歧化酶修饰物；所述Cu/Zn‑超氧化物歧化酶与不饱和脂肪酸的活化产物的投料摩尔比为1：5～100，其中Cu/Zn‑超氧化物歧化酶分子量以30000计算，不饱和脂肪酸的活化产物的摩尔数以不饱和脂肪酸的当量计。