一种检测活动性肺结核病的试剂盒

摘要

本发明提供一种检测活动性肺结核病的诊断试剂盒，由RNA提取缓冲液，活动性肺结核病特异的血清miRNA组合物、内参反转录引物、PCR引物以及荧光定量RT-PCR反应液构成，其中活动性肺结核病特异的血清miRNA组合物由4个差异表达的血清miRNAs组成：hsa-miR-29c、hsa-miR-22、hsa-miR-320b和hsa-miR-101。本发明采用活动性肺结核病的特异血清miRNAs组合，在血清miRNAs水平上对活动性肺结核病检测，灵敏度为90.2%、特异性为75.0%，对活动性肺结核病具有早期诊断价值，可实现对活动性肺结核病的早期预警和早期诊断。

主权项

1.一种检测活动性肺结核病的诊断试剂盒，由RNA提取缓冲液，活动性肺结核病特异的血清miRNA组合物、内参反转录引物和PCR引物以及荧光定量RT-PCR反应液构成，其中活动性肺结核病特异的血清miRNA组合物由4个差异表达的血清miRNAs组成：hsa-miR-29c、hsa-miR-22、hsa-miR-320b和hsa-miR-101；所述的RNA提取缓冲液有：QIAzol^®LysisReagent、氯仿、无水乙醇、RWT溶液、RPE溶液和RNAase-free水；所述的荧光定量RT-PCR反应液，包括反转录和荧光定量PCR反应液；其中反转录反应液有：总RNA、2μM反转录引物、5×反应缓冲液、10mMdNTP、RNase抑制剂、反转录酶；荧光定量PCR反应液有：SYBR^®PremixExTaq™，TliRnaseHPlus、PCR上游引物、PCR下游引物、ROXReferenceDye、模板cDNA和ddH₂O；逆转录引物序列为：hsa-miR-29c：5’-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACTAACCG-3’，hsa-miR-22：5’-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACACAGTT-3’，hsa-miR-320b：5’-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACCCCGTT-3’，hsa-miR-101：5’-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACTTCAGT-3’，内参hsa-miR-16：5’-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACCGCCAA-3’，PCR上游引物序列为：hsa-miR-29c：5’-GGCGGTAGCACCATTTGAA-3’，hsa-miR-22：5’-CGGAAGCTGCCAGTTGAAGA-3’，hsa-miR-320b：5’-AAAAGCTGGGTTGAGAGGGCA-3’，hsa-miR-101：5’-GGGTACTGTGATAACTGAAGG-3’，内参hsa-miR-16：5’-CGCGCTAGCAGCACGTAAAT-3’；PCR通用的下游引物序列是：5’-AGTGCAGGGTCCGAGGTATT-3’。