一种抗人源多药耐药蛋白Fab抗体及其制备方法

摘要

本发明提供了一种抗人源多药耐药蛋白Fab抗体及其制备方法，属于抗体及其制备领域；本发明为取多药耐药性大肠癌病理组织总RNA并逆转录为cDNA，利用本实验室设计的特异性引物扩增出P-gp跨膜区（氨基酸784～968）基因片段，克隆至pET28a（+）载体并转化E.coliBL21（DE3），IPTG，30℃诱导表达，表达产物经镍离子亲和层析柱纯化后WesternBlot鉴定。将纯化的P-gp784-968蛋白作为抗原，对利用17条重链上游引物和5条重链下游引物；20条轻链上游引物及2条轻链下游引物，用原核表达的P-gp784-968肽段对pComb3载体的P-gpFab抗体库进行五轮淘选，最终淘选所获得的克隆进行双酶切鉴定及IPTG诱导表达，表达产物通过ELISA及WesternBlot鉴定后获得阳性克隆菌株，并测序，得PFab29。本发明为制备抑制肿瘤多药耐药的药物提供可能。

主权项

一种抗人源多药耐药蛋白Fab抗体，其特征在于：基因全序列见序列表SEQ ID No.1，3。