| 摘要 |
1. Способ селекции по меньшей мере одной эукариотической клетки-хозяина, экспрессирующей целевой продукт, включающий по меньшей мере следующие стадии:(а) получения множества эукариотических клеток-хозяев, жизнеспособность которых зависит от потребления фолата, причем указанные эукариотические клетки-хозяева включают по меньшей мере(i) интродуцированный полинуклеотид, кодирующий целевой продукт, и(ii) интродуцированный полинуклеотид, кодирующий фермент дигидрофолатредуктазу (ДГФР),(б) культивирования указанного множества эукариотических клеток-хозяев в селективной культуральной среде, включающей по меньшей мере ингибитор ДГФР и фолат в предельно допустимой концентрации,(в) отбора по меньшей мере одной эукариотической клетки-хозяина, экспрессирующей целевой продукт.2. Способ по п.1, в котором селективная культуральная среда включает ингибитор ДГФР в концентрации 500 нМ или менее и фолат в концентрации 500 нМ или менее.3. Способ по п.1 или 2, в котором селективная культуральная среда включает ингибитор ДГФР в концентрации 200 нМ или менее и/или включает фолат в концентрации 2,5-100 нМ.4. Способ, в котором селективная культуральная среда включает в качестве фолата фолиевую кислоту в концентрации 12,5-50 нМ вместе с метотрексатом (МТК) в качестве ингибитора ДГФР в концентрации 10-100 нМ.5. Способ по меньшей мере по п.1 или 2, в котором фермент ДГФР означает такой фермент ДГФР, который обладает пониженной чувствительностью к ингибитору ДГФР по сравнению с ферментом ДГФР, эндогенно экспрессированным клеткой-хозяином.6. Способ по п.1 или 2, в котором указанная эукариотическая клетка-хозяин является клеткой-хозяином СНО, предпочтител� |
