一种控制乙型肝炎病毒持续性感染的疫苗

摘要

本发明属生物技术领域，涉及一种控制乙型肝炎病毒持续性感染的疫苗。本发明利用热灭活的表达乙肝表面抗原的汉逊酵母细胞作为乙肝疫苗，其中HBsAg是疫苗的抗原部分，汉逊酵母细胞为疫苗的佐剂部分。动物免疫实验证实：该疫苗能够诱导免疫细胞向脾脏聚集，促进DCs的成熟，该疫苗不但能够在小鼠体内诱生Th1方向的免疫应答，而且还能够增强Th2方向的免疫应答，包括总IgG，IgG1，IgG2a，特异性CTL活性，抗原特异的IFN-γ产生能力。本发明能弥补以氢氧化铝作为佐剂的传统乙肝疫苗不能诱生Th1型免疫应答的缺陷，有助于控制HBV的持续性感染。

主权项

一种控制乙型肝炎病毒持续性感染的疫苗包活抗原部分和佐剂成分，其特征在于，所述疫苗以乙肝表面抗原为抗原，以汉逊酵母细胞作为佐剂，所述的乙肝表面抗原和汉逊酵母细胞为一个整体；通过下述方法制备：PCR方法扩增乙肝表面抗原片断，通过酶切连接，将目的基因亚克隆到多拷贝表达载体pDGXHP2.0中，形成重组表达质粒，将制得的重组表达质粒转化汉逊酵母细胞ATCC26012宿主菌，转化细胞孵箱培养，将转化菌落转接入含有0.14％无氨基酵母氮源、0.5％硫酸铵、2％葡萄糖的液体培养基中传代培养，将筛选的整合有外源基因的重组菌株接入含有1％酵母提取物、2％蛋白胨、2％葡萄糖的培养基中，加入冻存液‑70℃保存，选择重组菌株进行MDL培养，离心转接到含有1％甲醇、0.67％无氨基酵母氮源、0.5％硫酸铵培养基中进行诱导，制得热灭活的乙肝表面抗原和重组汉逊酵母细胞为一整体的疫苗。