活性高度磷酸化人类N-乙酰半乳糖胺-6-硫酸酯酶的制备及其用途

摘要

本发明提供活性高度磷酸化人类N-乙酰半乳糖胺-6-硫酸酯酶(GALNS)的组合物、医药组合物及制剂，产生及纯化GALNS的方法，及在诊断、防治或治疗疾病及病状，特别包括GALNS酶缺乏所引起或相关的溶酶体储积疾病，例如黏多糖病(Mucopolysaccharidosis)Iva(MPS IVa或莫奎欧(Morquio)A综合征）的用途。

主权项

一种纯化重组人类N‑乙酰半乳糖胺‑6‑硫酸酯酶(GALNS)的方法，所述GALNS酶包含与SEQ ID NO:4的氨基酸27至522至少95%一致的氨基酸序列，其中所述GALNS酶：(i)具有至少约95%的纯度，如在非还原条件下进行SDS‑PAGE时通过考马斯蓝(Coomassie Blue)染色所测定，(ii)具有位置53的半胱氨酸残基转化为Cα‑甲酰甘氨酸(FGly)的至少约50%转化率，及(iii)可选地，每条单体蛋白质链具有0.5至0.8条双磷酸化寡甘露糖链，且其中至少97%的所述GALNS酶系呈前体形式，如通过SDS‑毛细管凝胶电泳(SDS‑CGE)所测定，所述测定包含：a)过滤含有由表达人类硫酸酯酶修饰因子1(SUMF1)及所述重组人类GALNS酶的哺乳动物细胞系分泌的所述GALNS酶的培养基，超滤/渗滤所述经过滤的培养基，及木炭过滤所述经超滤/渗滤的培养基；b)步骤a)所述经木炭过滤的经超滤/渗滤培养基装载于捕获柱上，在使所述GALNS酶保留在所述捕获柱上的条件下洗所述捕获柱，及自所述捕获柱洗脱所述GALNS酶；c)可选地，步骤b)中所述捕获柱的洗脱液由过滤器过滤以去除病毒；d)调整步骤b)所述捕获柱的洗脱液或步骤c)的滤液的pH至酸性pH，及过滤所述捕获柱的所述经调整为酸性pH的洗脱液或所述经调整为酸性pH的滤液；e)所述捕获柱的所述经调整为酸性pH的洗脱液或步骤d)所述经调整为酸性pH的Q滤液装载于中间柱上，在使所述GALNS酶保留在所述中间柱上的条件下清洗所述中间柱，及从所述中间柱洗脱所述GALNS酶；f)调整步骤e)中所述中间柱的洗脱液至低pH以使病毒失活；及g)步骤f)所述低pH病毒失活的洗脱液装载于精制柱(polishing column)上，在使所述GALNS酶保留在所述精制柱上的条件下清洗所述精制柱，及从所述精制柱洗脱所述GALNS酶。