一种基因重组大肠杆菌及其高效生产普鲁兰酶的方法

摘要

一种基因重组大肠杆菌及其高效生产普鲁兰酶的方法，属于微生物发酵技术领域。本发明将质粒pET20b(+)的信号肽PelB与长野芽孢杆菌（Bacillusnaganoensis）CCTCC NO：M2012388普鲁兰酶基因pul连接，并共同插入表达载体pET28a(+)中，构建带有信号肽和目的基因的重组菌株E.coliBL21(DE3)/pET28a(+)-PelB-pul。将自诱导培养和添加甘氨酸调控细胞透性的策略用于胞外普鲁兰酶的发酵生产，采用乳糖浓度10g/L的自诱导培养基，于37℃、200rpm震荡培养约2h后，添加终浓度6g/L的甘氨酸并转入20℃下培养70h，胞外普鲁兰酶酶活达505U/mL，比野生菌出发菌株的酶活力提高1260倍。本发明的应用具有重要意义。

主权项

一种长野芽孢杆菌（Bacillus naganoensis）LBMAE‑1，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO：M 2012388；来源于CCTCC NO：M 2012388菌株的普鲁兰酶基因pul，其核苷酸序列为SEQ ID NO: 1，其氨基酸序列为SEQ ID NO: 2。