一种醋酸液态发酵快速启动的方法

摘要

一种醋酸液态发酵快速启动的方法，属于发酵优化和生物工程技术领域。本发明涉及发酵启动策略、醋酸菌发酵营养盐的配比和使用策略、补料策略。步骤为：（1）将乙醇和对数中后期的新鲜种子液混合，接种量为1∶5-1∶20，初始醋酸浓度10-20g/L，初始乙醇浓度40-60g/L，体积为终体积的30%；（2）醋酸含量达30g/L，加1‰-5‰发酵营养盐，再加15%终体积量的乙醇，体积为终体积的45%；（3）醋酸含量达40g/L，加22%终体积量的乙醇，醋酸浓度下降到27g/L；(4)醋酸含量又达40g/L，加最后33%终体积量的乙醇，补加发酵营养盐1‰-2.5‰。本发明设计独特，满足醋酸菌发酵的营养需要，缩短发酵启动周期、改善醋酸质量、提高醋酸产量、降低生产成本，适于大规模推广应用。

主权项

一种醋酸液态发酵快速启动的方法，其特征在于步骤如下：（1）将乙醇和对数中后期的新鲜种子液混合，接种量为1:5‑1:20，初始醋酸浓度为10‑20 g/L，初始乙醇浓度为40‑60 g/L，控制该步骤混合后的体积为终体积的30%，于30℃、通气量为0.25vvm发酵；所述对数中后期的新鲜种子液为在种子罐中发酵到对数中后期的醋酸发酵液；该醋酸发酵液OD600达到1.1‑1.3，无菌体沉降，镜检无菌体自溶现象；（2） 发酵至醋酸含量达到30g/L时，加入醋酸菌发酵营养盐1‰‑5‰（w/v），再加入15%终体积量的乙醇，使得本步骤发酵体积达到终体积的45%，于30℃通气量0.25vvm发酵；所述醋酸菌发酵营养盐为本实验室已公开发明专利201010510084.5经过改良的醋酸菌发酵营养盐：包括以重量百分计26％‑27％水解酵母粉，15％‑16％柠檬酸铵，44％‑45％葡萄糖，4％‑5％磷酸氢二钾，3％‑4％磷酸氢二钠，5％‑6％硫酸镁；在此基础上加入1%‑5%异戊醇、对羟基苯甲酸、莽草酸、3,3‑二甲基丙烯酸、3‑甲基‑2‑丁烯‑1‑醇中的一种；所述的醋酸菌发酵营养盐，发酵前12小时溶解于水中，制成15%‑30%（w/v）浓度的营养盐溶液，发酵前加入1%（v/v）液态发酵醋，5%（v/v）食用酒精配制成营养盐溶液加入；（3） 发酵至醋酸含量达到40 g/L 时，加入22%终体积量的乙醇，此时醋酸浓度下降到27g/L，于30℃通气量0.25vvm发酵；（4） 发酵至醋酸含量再次达到40 g/L时，加入最后33%终体积量的乙醇，补加醋酸菌发酵营养盐1‰‑2.5‰（w/v），于30℃通气量0.25vvm发酵；步骤（3）、（4）中所述的加入乙醇的方法是流加，添加时间不超过10min，如发酵体积过大，采用2－3个进样口同时流加；启动时间为：从初始到OD600达到0.8‑1.0，启动时间应小于18h。