青龙衣高效液相色谱指纹图谱的建立方法及其使用方法

摘要

青龙衣高效液相色谱指纹图谱的建立方法及其使用方法，它涉及中药材指纹图谱的建立方法和使用方法。本发明目的是提供青龙衣高效液相色谱指纹图谱的建立方法及其使用方法。建立方法：一、供试品溶液的制备；二、对照品溶液的制备；三、指纹图谱的制作；四、标准指纹图谱的确定。使用方法：将青龙衣的高效液相色谱指纹图谱与权利要求1得到的青龙衣的标准指纹图谱相比较，相似度大于50％属于合格产品。本发明具有方法简便、稳定、精密度高、重现性好、易于掌握的特点。适用于青龙衣药材真伪、产地和品质的鉴别和控制。本发明为全面、准确评价青龙衣的质量提供了新的方法，也为提高青龙衣药材及其制剂的质量标准工作作出贡献。

主权项

青龙衣高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征在于青龙衣高效液相色谱指纹图谱的建立方法是通过下述步骤进行的：一、供试品溶液的制备是通过下述步骤完成的：步骤a、将新鲜的青核桃的外表皮削下后阴干，然后粉碎成粉末状，再用乙醇浸泡3次后滤过，每次浸泡时间为48h，合并滤液后减压蒸馏回收溶剂，得青龙衣浸膏，步骤b、将4g青龙衣浸膏加入5mL水中，充分搅拌，静置30min，滤过，滤液用AB‑8型大孔树脂柱吸附，然后用蒸馏水洗脱至流出液无色，弃去蒸馏水洗脱的洗脱液，再用体积浓度为30%的乙醇溶液洗脱至流出液无色，收集用体积浓度为30%的乙醇溶液洗脱的洗脱液，减压蒸馏回收溶剂，干燥后得到干燥固体A，步骤c、将步骤b获得干燥固体A溶解于蒸馏水中，然后用质量浓度为1%的盐酸溶液调pH值为2，再用乙酸乙酯萃取3次，乙酸乙酯用量与溶解干燥固体A所用蒸馏水体积相等，然后合并萃取液，减压蒸馏回收溶剂，干燥后得到干燥固体B 60mg，步骤d、精密称取20mg步骤c获得的干燥固体B，置于容量瓶中，用甲醇溶解成浓度为400μg/mL的溶液，过0.45μm微孔滤膜，滤液作为供试品溶液；二、对照品溶液的制备：精密称取（4S）‑4,5‑二羟基‑α‑四氢萘酮‑4‑O‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷，用甲醇溶解配制成浓度为50μg/mL的溶液，作为对照品溶液；三、指纹图谱的制作：以粒径为5μm的YMC‑Pack ODS A C18作为色谱分离柱填料，色谱分离柱的柱长为250mm且内径为4.6mm，由A液和B液组成混合流动相，A液为体积浓度为0.2%的磷酸水溶液，B液由甲醇和体积浓度为0.2%的磷酸水溶液按9：1的体积比组成，流动相的流速为0.8mL/min，检测波长为259nm，柱温为35℃，精密吸取供试品溶液和对照品溶液各20μL，分别注入高效液相色谱仪采用梯度洗脱进行测定，以对照品溶液的色谱峰保留时间和峰面积为1计算相对保留时间和相对峰面积，得到青龙衣的指纹图谱，其中梯度洗脱程序为：0min～35min→35min～60min→60min～100min→100min～130min，从0min到35min混合流动相中B液的体积浓度由15%梯度匀速增加到20%，从35min到60min混合流动相中B液的体积浓度由20%梯度匀速增加到30%，从60min到100min混合流动相中B液体积浓度由30%梯度匀速增加到40%，在100min～130min时间段内混合流动相中B液体积浓度保持为40%；四、标准指纹图谱的确定：确定了14个共有特征峰；1号共有特征峰相对保留时间为0.512±0.25%，2号峰相对保留时间为0.532±0.17%，3号峰相对保留时间为0.598±0.11%；4号峰相对保留时间为0.689±0.24%，5号峰相对保留时间为0.802±0.11%，6号峰相对保留时间为0.942±0.08%，7号峰相对保留时间为1.000，8号峰相对保留时间为1.065±0.08%， 9号峰相对保留时间为1.144±0.06%，10号峰相对保留时间为1.239±0.06%，11号峰相对保留时间为1.342±0.07%，12号峰相对保留时间为1.541±0.05%，13号峰相对保留时间为1.675±0.04%，14号峰相对保留时间为1.814±0.05，上述共有特征峰构成了青龙衣的指纹特征，作为青龙衣的标准指纹图谱，其中7号峰为对照品溶液峰。