一种稳定联产异丙醇和丁醇的工程菌及其构建方法与应用

摘要

本发明公开了一种稳定联产异丙醇和丁醇的工程菌及其构建方法与应用。该工程菌的构建方法，包括如下步骤：将次级醇脱氢酶的编码基因整合到产丁醇梭菌的基因组中，得到的重组菌即为所述工程菌。所述次级醇脱氢酶是如下a)或b)的蛋白质：a)由序列表中序列7所示的氨基酸序列组成的蛋白质；b)将序列表中序列7的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有如下功能由(a)衍生的蛋白质：将丙酮催化成异丙醇。该工程菌可以稳定地生产丁醇、异丙醇和乙醇。

主权项

一种工程菌的构建方法，包括如下步骤：将次级醇脱氢酶的编码基因整合到产丁醇梭菌的基因组中，得到的重组菌即为所述工程菌；所述次级醇脱氢酶是由序列表中序列7所示的氨基酸序列组成的蛋白质；所述次级醇脱氢酶的编码基因的核苷酸序列如序列表中序列1所示；所述将次级醇脱氢酶的编码基因整合到产丁醇梭菌的基因组中，通过将如下片段导入所述产丁醇梭菌中实现：由所述次级醇脱氢酶的编码基因和启动所述次级醇脱氢酶的编码基因转录的启动子组成的DNA片段；由所述次级醇脱氢酶的编码基因和启动所述次级醇脱氢酶的编码基因转录的启动子组成的DNA片段的核苷酸序列为序列8的第287‑1498位；所述产丁醇梭菌为丙酮丁醇梭菌或拜氏梭菌。