一种羧甲基纤维素酶活力的测定方法

摘要

本发明涉及一种羧甲基纤维素酶活力测定方法。经过考察显色剂用量、显色时间、静置时间、羧甲基纤维素钠底物浓度、酶促反应温度、酶促反应时间、酶液稀释度等猴头菌培养物活性成分酸性羧甲基纤维素酶活力测定的影响因素，以及该测定方法的精密度与适应性，最终确立了酸性羧甲基纤维素酶活力的测定方法。本发明具有测定方法简便快速，测定现象清晰明了，测定结果准确可靠。

主权项

一种羧甲基纤维素酶活力的测定方法，包括如下步骤：（1）猴头菌培养物溶液的制备：猴头菌培养物经粉碎，过筛，以适量水溶解，振摇2~4小时，滤过，定容。（2）吸光度测定：精密量取1%羧甲基纤维素钠溶液1.5ml置具塞刻度试管中，精密加猴头菌培养物溶液0.5ml，混匀，置45~55℃水浴中保温25~35分钟，取出，立即精密加入DNS试剂1.5ml，摇匀，置沸水浴中保温5~15分钟，取出，迅速自来水冷却10分钟，再加水至刻度，摇匀，静置1~2小时，以空白管进行调零，在540nm波长处测定吸光度。空白管加1%羧甲基纤维素钠溶液1.5ml，置45~55℃水浴中保温25~35分钟，取出，精密加猴头菌培养物溶液0.5ml，混匀，立即精密加入DNS试剂1.5ml，摇匀，置沸水浴中保温5~15分钟，取出，迅速自来水冷却10分钟，再加水至刻度，摇匀，静置1~2小时。（3）计算羧甲基纤维素酶活力：从葡萄糖标准曲线上读出猴头菌培养物溶液中还原糖的重量（mg），按照下式计算羧甲基纤维素酶活力：U=A×1/0.5×n×2式中 U——每1g含酸性羧甲基纤维素酶活力单位，U/g；A——吸光度在标准曲线上查得的还原糖重量，mg；n——样品稀释倍数；2——时间换算系数。1g固体酶在50±1℃、pH4.8条件下，1小时水解1%羧甲基纤维素钠底物，产生出相当于1 mg葡萄糖的还原糖量为一个酸性羧甲基纤维素酶活力单位，以U/g表示。