抗白唇竹叶青蛇毒卵黄抗体的制备方法

摘要

本发明公开了一种抗白唇竹叶青蛇毒卵黄抗体的制备方法，其包括(1)取成年白唇竹叶青蛇的蛇毒制备白唇竹叶青蛇毒抗原，将抗原注射到产蛋母鸡中，免疫后收集鸡蛋低温保存；(2)通过水稀释法、硫酸铵盐析法和嗜硫色谱法提取和纯化得到抗白唇竹叶青蛇毒卵黄抗体。通过本发明的方法所制备的抗白唇竹叶青蛇毒卵黄抗体纯度高，可以有效阻止白唇竹叶青蛇毒对机体的攻击。

主权项

一种抗白唇竹叶青蛇毒卵黄抗体的制备方法，其包括如下步骤：(1)取成年白唇竹叶青蛇的蛇毒制备白唇竹叶青蛇毒抗原，将抗原注射到产蛋母鸡中，免疫后收集鸡蛋低温保存；(2)提取和纯化抗白唇竹叶青蛇毒卵黄抗体：①水稀释法取免疫后鸡蛋，分离出蛋黄液，用双蒸水将卵黄液按1∶8‑10稀释，调节pH值为5.0‑5.2之间，搅拌均匀，0‑4℃放置10h‑12h，然后以16000‑20000g/min低温超速离心10‑20min，上清液经超滤浓缩，即为卵黄抗体水提物；②硫酸铵盐析法在卵黄抗体水提物中加入硫酸铵至35‑45％饱和度，充分混匀，0‑4℃放置6‑10h，离心后弃上清，沉淀即为IgY盐析物；③嗜硫色谱法先以pH 7.4‑7.6的含0.5‑0.7M Na2SO4的15‑25mM PBS平衡HiTrap IgYPurification HP色谱柱，将IgY盐析物用上述缓冲液溶解后过0.45μm滤膜，通过自动进样阀上样，洗脱未结合组分后，换用pH 7.4‑7.615‑25mM PBS(不含Na2SO4)进行洗脱，流速1ml/min，检测波长280nm，收集洗脱峰，经脱盐处理后冻干，即得本发明的抗白唇竹叶青蛇毒卵黄抗体。