一种高纯度牛血清白蛋白的制备方法

摘要

本发明提供一种高纯度牛血清白蛋白的制备方法，包括如下步骤：A）分离血浆；B）制备血清；C）加热提取；D）置换溶液和浓缩；E）DEAE柱进一步纯化；F）BSA剂型处理。本发明用料少，可节约投入；工艺流程短，省时省力；操作简单，重复性好，适合大批量生产；目标产品得率高、纯度高、质量好，本方法制得的成品牛血清白蛋白经过质量检验，产品质量完全符合现行行业质量标准，使用效果良好，可满足生化试剂与生物制药行业对牛血清白蛋白的质量要求；成本低，经济效益显著。

主权项

一种高纯度牛血清白蛋白的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：A）分离血浆：取新鲜牛血，加入血量体积的10%的抗凝剂，轻轻搅拌使抗凝剂分散均匀，4℃，1500rpm离心，分离收集血浆；B）制备血清：室温下，取所述血浆，边搅拌边加入无水氯化钙粉末，待所述无水氯化钙粉末完全溶解后静置0.8~1.2h，将凝结成果冻状的血浆块打碎，5000 rpm离心，上层澄清液体即为牛血清，下层乳黄色凝块为纤维蛋白，收集所述牛血清；C）加热提取：取所述牛血清用pH5.2~7.0 PBS缓冲液稀释2~10倍后放入带夹层的反应釜中，加入辛酸钠并搅拌使之完全溶解，再加入所述牛血清体积的5%~20%的乙醇，用1当量浓度的HCl调pH值至4.0~6.2，油浴加热，使反应釜中牛血清的温度保持在55~75℃，0.8~1.2h后取出反应液，压滤机压滤，收集滤液，弃掉滤渣；D）置换溶液和浓缩：将所述滤液用20000分子量以下的超滤装置过滤并将缓冲体系置换为pH8.0~8.5 Tris‑HCl，同时进行浓缩；E）DEAE柱进一步纯化：装柱后用pH8.0~8.5 Tris‑HCl平衡柱子，将超滤浓缩后的BSA溶液泵入层析柱中，并继续用pH8.0~8.5 Tris‑HCl平衡，待接入纯化系统中的核酸蛋白检测仪吸光值有所上升时，收集穿透组分，待穿透峰回落至基线后用含0.15M NaCl的pH8.0~8.5 Tris‑HCl溶液洗脱，待核酸蛋白检测仪吸光值有所上升时，收集洗脱组分并脱盐浓缩，得到脱盐浓缩后的洗脱组分；F）BSA剂型处理：取所述脱盐浓缩后的洗脱组分，加入防腐剂、络合剂，得到高纯BSA溶液，或直接进行冷冻干燥，得到BSA冻干粉。