利用免疫层叠法进行可溶性靶物质的检测方法

摘要

本发明公开了一种利用免疫层叠法进行可溶性靶物质的检测方法，它以现代免疫血清学试验为基础，通过引入传统均相或类均相免疫实验，建立血清抗原或抗体检测免疫层叠实验方法，包括以下步骤：（1）试剂与标准血清的准备；（2）进行基础免疫实验：即现代高敏感性免疫血清学试验（如LiCA实验等）；（3）进行叠加免疫实验：即相对低敏感性免疫实验（如絮状免疫凝集实验等）；（4）综合得出实验结果。该方法将两种具有较大反差的免疫实验有机结合，既保留了LiCA所具有的敏感，特异及其稳定等优点，操作简捷，又能克服Hooks效应干扰及其定量检测范围狭窄的技术问题，能满足精度要求高，浓度变异范围大的实验要求，能进行全程定量检测，具有高度的实用性。

主权项

一种利用免疫层叠法进行可溶性靶物质的检测方法，其特征在于：它包括如下步骤：（1）向血清中加入实验试剂进行基础免疫实验，所述基础免疫实验为免疫层叠实验的第一次免疫反应，所述实验试剂为基础免疫实验的实验试剂，所述基础免疫实验为放射免疫实验、高敏感性乳胶凝集试验、固相酶联免疫实验、化学发光免疫实验、电化学发光免疫实验、时间分辨免疫荧光实验或光激发化学发光类免疫实验之中任一种实验；（2）对步骤1试验过程中所产生的实验信号进行检测，检测出的实验信号依据靶物质浓度与实验信号的函数关系，确定低浓度段靶物质含量， 所述低浓度段为基础免疫实验检测所取得的定量范围：（3）在步骤(1)结束后，通过向第一次免疫反应后的反应体系中定量加入抗He试剂，进行至少一次的叠加免疫实验；抗He试剂为溶解于水中的能与靶物质特异性结合的抗体或抗原，所述抗体或抗原游离于水中或吸附在悬浮于水中的固相载体上，抗He试剂中抗体浓度为0.05～1000 µg/ml，或抗原浓度为0.01～500 µg/ml，加入抗He试剂体积与基础免疫实验结束时实验体系的体积比例为1：1～20； （4）对步骤3实验过程中所产生的实验信号进行检测，检测出的实验信号依据靶物质浓度与实验信号的函数关系，确定高浓度段靶物质含量；所述高浓度段为叠加免疫实验检测所取得的能够定量的检测范围：（5）取基础免疫实验能精确反应靶物质浓度的上限值为叠加免疫实验结果靶物质浓度取值的下限值，将叠加免疫实验的下限值以上部分的实验结果与基础免疫实验上限值以下部分的实验结果进行交汇叠加；形成新的靶物质含量与实验信号强度的关系，并据此计算待测标本中的靶物质浓度。