EV-71型病毒蚀斑纯化方法

摘要

本发明公开了一种EV-71型病毒蚀斑纯化的方法。该方法包括下述步骤：1)制备单层vero细胞，加入含病毒的样品液，吸附1小时；2)将吸附后的细胞表面覆盖一层MEM固体培养基培养至病毒蚀斑出现；3)挑取病毒蚀斑获得病毒液。本发明的方法用病毒样品吸附Vero细胞单层，覆盖MEM细胞固体培养基，3-5天可以看到明显的蚀斑形成，实验证明，经过3轮蚀斑纯化和扩增后，RT-PCR检测和测序表明已经得到纯化的病毒株。

主权项

一种用于非诊断目的的EV‑71型病毒蚀斑纯化方法，包括下述步骤：1)制备单层vero细胞，加入待纯化的样品液，吸附1‑2小时；2)将吸附后的细胞表面覆盖一层培养哺乳动物细胞用固体培养基培养至病毒蚀斑出现；3)挑取病毒蚀斑获得病毒液；所述培养哺乳动物细胞用固体培养基为：将预热至56℃的浓度为2.5g/L的Gelrite Gellan Gum水溶液与含有体积百分含量为2％的胎牛血清的2×MEM培养基等体积混合后降至室温时形成的固体凝胶；所述2×MEM培养基的组成为：10×MEM 200mL，去离子水800mL，2M HEPES 20mL，200mmol/l L‑Glutamine 20mL，100×NEAA 20mL，100U/ml的青霉素，100U/ml的链霉素，质量百分浓度为7.5％的NaHCO350mL。