一种分离纯化制备绿茶多糖的方法及其应用

摘要

本发明涉及一种分离纯化制备绿茶多糖的方法及其在制备抗凝血保健品和药物中的应用。其制备方法是绿茶经粉碎、浸提、醇沉、冷冻真空干燥得粗多糖；过聚酰胺柱动态脱色和去蛋白；后经DEAE sepharose CL-6B离子交换柱进一步纯化得绿茶多糖。本发明的技术效果是：有效的去除了绿茶粗多糖中的色素与蛋白质，分离纯化获得的组分与食品药物工艺上可接受的其它原料及辅料开发成相宜的具有抗凝血功能的保健食品制剂和药物制品，如胶囊剂、片剂、口服液等。实验证明，该多糖安全无毒，在制备抗凝血保健品和药物中具有良好的抗凝血功能，有着良好的开发应用前景。

主权项

一种分离纯化制备绿茶多糖的方法，特征在于其具体步骤为1）提取：茶叶经粉碎机粉碎后过60‑100目筛，将粉碎后的茶叶末与蒸馏水按1:10‑40的重量比在30‑70℃下浸提30‑150min，提取液过滤除去杂质后浓缩到除杂后提取液体积的1/5到1/4，后缓缓加入浓缩后提取液3‑4倍体积的无水乙醇，醇沉12‑24h后离心去除上清液，于‑40到‑80℃下冷冻干燥得粗多糖；2）脱色、去蛋白：将步骤1）制备的粗多糖溶于蒸馏水中，经时间为10‑20min，转速为3600‑4000r/min离心后上聚酰胺柱，以蒸馏水为流动相，流速为1.0‑2.0ml/min，收集多糖溶液，将收集的多糖溶液浓缩到原体积的1/5到1/4，后缓缓加入体积为浓缩后多糖溶液3‑4倍体积的无水乙醇，醇沉12‑24h后离心去除上清液，于‑40到‑80℃下冷冻干燥得到初步纯化的绿茶多糖；3）茶多糖纯化：将步骤2）制备的初步纯化多糖溶于pH5.9‑7.9，0.02‑0.05mol/L磷酸盐缓冲液中，经时间为10‑20min，转速为8000‑10000r/min离心除去不溶物后上DEAEsepharose CL‑6B离子交换柱，控制洗脱速度为1.0‑2.0ml/min进行梯度洗脱，第一阶段用PBS洗脱，第二阶段用含0.1mol/LNaCl的PBS洗脱，第三阶段用含0.2mol/LNaCl的PBS洗脱，第四阶段用含0.5mol/LNaCl的PBS洗脱，只收集第四阶段洗脱的多糖溶液，将收集的多糖溶液浓缩至浓缩原体积的1/5到1/4，透析48‑72h后于‑40到‑80℃下冷冻干燥得绿茶多糖。