混合培养酵母和藻类生产油脂的方法

摘要

本发明公开了一种混合培养酵母和藻类生产油脂的方法。该方法利用工业废水为培养基，混合培养酵母和藻类，生产微生物油脂。其特点是：酵母和藻类的混合培养与两种微生物单独培养相比，能够更有效地降解废水的COD，也促进了酵母和藻类对工业废水中营养成分的合理利用，利于油脂的合成。本发明微生物油脂的生产方法有操作简单、成本低廉和实用价值高的优点，既能减少高浓度的工业废水对环境的污染，又能变废为宝生产紧缺产品油脂，达到了废弃物资源化利用的目的。

主权项

混合培养酵母和藻类生产油脂的方法，其特征在于，所用微生物为粘红酵母和小球藻（Chlorella vulgaris ）FACHB‑Collection No.791种子液培养基配方为：粘红酵母：葡萄糖 4g；酵母粉 0.15g；(NH4)2SO4 0.2g；KH2PO4 0.7g； Na2SO4 0.2g；MgSO4·7H2O 0.15g，用水定容至100ml，调pH至5.5；小球藻：NaNO3 1.5g；K2HPO4·3H2O 0.04g；MgSO4·7H2O 0.075g；CaCl2·2H2O 0.036g；柠檬酸 0.006g；柠檬酸铁铵 0.006g；EDTA 0.001g； Na2CO3 0.02g；A5 1mL；加水定容至1L；A5配方：H3BO3 2.86g；MnCl2·H2O 1.81g；ZnSO4·7H2O 0.222g；CuSO4·5 H2O 0.079g；Na2MoO4·2H2O 0.390g；Co(NO3)2·6H2O 0.049g；混合培养基为优化培养基，配方为：MgSO4·7H2O 1.5g/L；K2HPO4 0.5g/L；KH2PO4 7.0g/L；Na2SO4 1.0g/L；K2SO4 1.0g/L；NaCl 1.0g/L；NaNO3 2.0g/L；(NH4)2SO4 2.0g/L；脲2.0g/L；大豆蛋白胨10.0g/L；酵母粉6.0g/L；葡萄糖80.0g/L；糖蜜5.0g/L；FeSO4·7H2O 10mg/L；EDTA 80mg/L；CaCl2 4mg/L； H3BO3 2.86mg/L；(NH4)6Mo7O24 0.02mg/L；MnCl2·4H2O 1.80mg/L；CuSO4·5H2O 0.125mg/L；ZnSO4·7H2O 0.22mg/L，pH用氨水控制在5.5；具体方法包括以下步骤：（1）小球藻种子液的制备：取10ml悬液接种于装有90ml无菌小球藻培养基的250ml三角瓶中，在28℃，光强2000lx条件下，培养72h，得到种子液；（2）粘红酵母菌种活化：将保藏的斜面粘红酵母菌种CGMCC No.2258在28℃下活化12h；（3）用接种针刮一环步骤（2）经活化的斜面粘红酵母菌种CGMCC No.2258，将其接种于装有50ml无菌种子液培养基的250ml三角瓶中，在30℃、140rpm下，振荡培养30h，得到种子液；（4）发酵培养：分别按10%的接种量，将所得小球藻种子液和粘红酵母种子液接到装有2L无菌优化培养基的5L搅拌罐中，在温度30℃、无菌空气通气量2L/min、光强4000lx、搅拌转速300rpm的条件下培养144h，葡萄糖浓度低于10.0g/L时，开始流加葡萄糖，流加量为60g/L，并通过控制葡萄糖流加速率将其浓度保持在20 g/L；（5）发酵后处理：发酵结束后，离心收集发酵菌体细胞，烘干、研磨后用索氏提取法提取微生物油脂。