凝结芽孢杆菌的PCR快速检测方法

摘要

一种快速检测凝结芽孢杆菌的PCR方法。首先提取待测样品增菌液的基因组DNA并稀释备用；再利用凝结芽孢杆菌基因组保守性DNA序列设计特异性引物；然后使用该引物对待测样品增菌液的基因组DNA进行PCR扩增，对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测。其加样参数为：每个PCR反应总体积为25μl，包括待测样品增菌液的基因组DNA，2μl；10×PCR Buffer，2.5μl；Mg2+1.5mmol/L；Tag酶1u；dNTP0.1mmol/L；权利要求1中的特异性引物各10pmol；最后加ddH2O至25μl；PCR反应程序为：95℃变性5min；95℃30s，56℃30s，72℃40s，该反应进行35个循环；72℃延伸5min，4℃保存。具有检测速度快、成本低的优点。

主权项

一种快速检测凝结芽孢杆菌的PCR方法，其特征在于首先提取待测样品增菌液的基因组DNA并稀释备用；再利用凝结芽孢杆菌基因组保守性DNA序列设计特异性引物；然后使用该引物对待测样品增菌液的基因组DNA进行PCR扩增，对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，其中所述的凝结芽孢杆菌特异性引物为：B.coag‑F：5’‑TACGGCATTGGCAAGTATCA‑3’；B.coag‑R：5’‑CGACATGATTTGGTTTTCCA‑3’；用该引物时的退火温度为56℃。