黑水缬草不定根培养生产缬草素的方法

摘要

黑水缬草不定根培养生产缬草素的方法，涉及一种生产缬草素的方法。本发明是要解决目前人工栽培的黑水缬草中缬草素含量低，植物细胞培养方法中缬草素含量不稳定的问题。方法：一、黑水缬草无菌苗的培养；二、取黑水缬草无菌苗的叶片置于固体培养基上诱导出不定根；三、诱导出的不定根接种到液体培养基中进行悬浮培养得到不定根；四、将步骤三得到的不定根经过冷冻干燥后，研磨成粉末，超声浸提，得提取液，真空过滤，干燥后得到提取物，即完成黑水缬草不定根培养生产缬草素。本发明生产的缬草素具有稳定的质量和产量，不受自然条件的限制和影响。提取物中含有质量百分比为80％～85％的缬草素。应用于缬草素生产领域。

主权项

黑水缬草不定根培养生产缬草素的方法，其特征在于黑水缬草不定根培养生产缬草素的方法，按以下步骤进行：一、黑水缬草无菌苗的培养：将黑水缬草种子于‑4℃冷冻7天，然后对种子进行除菌处理，之后置于不含激素的1/2MS培养基上萌发，得到幼苗，将幼苗移植到不含激素的MS培养基上培养，在16h光照条件下培养20～40天，得到黑水缬草无菌苗；二、取黑水缬草无菌苗的叶片置于固体培养基上，在无菌、24～26℃条件下进行暗培养，4周后诱导出不定根，将不定根置于固体培养基中继代培养，每4周继代培养一次；三、将步骤二诱导出的不定根接种到液体培养基中进行悬浮培养，在无菌、24～26℃、55～65r/min摇床转速下进行暗培养，4周后得到新不定根，将得到的不定根置于液体培养基中继代培养，每4周继代培养一次；四、将步骤三继代培养得到的不定根经过冷冻干燥后，研磨成粉末，用二氯甲烷在25～30℃超声浸提粉末30min，离心后收集上清液，然后再重复超声浸提沉淀2次，离心后收集上清液，合并上清液，得提取液，对提取液进行真空过滤，干燥后得到提取物，即完成黑水缬草不定根培养生产缬草素；其中步骤二所述固体培养基为含有1mg/L 2,4‑D、0.2mg/L KT和6g/L琼脂的MS培养基，步骤三所述液体培养基为含有0.2mg/L IBA和0.2mg/L KT的MS培养基。