主权项 |
一种醋酸去氨加压素的制备方法,其特征在于具体制备方法如下:(1)制备Fmoc‑Gly‑AM Resin:Rink AM Resin用二氯甲烷浸泡至充分溶胀,用N,N‑二甲基甲酰胺洗涤,然后用25%哌啶/N,N‑二甲基甲酰胺脱Fmoc保护基,洗涤后得到A产物;取Fmoc‑Gly‑OH,1‑羟基苯并三唑,N,N’‑二异丙基碳二亚胺加入到无水N,N‑二甲基甲酰胺中,在0~5℃活化后加入A产物,在25~35℃反应2~4 h后洗涤,得到Fmoc‑Gly‑AM Resin;(2)制备Mpa(trt)‑Tyr(tBu)‑Phe‑Gln(trt)‑Asn(trt)‑Cys(trt)‑Pro‑D‑Arg‑Gly‑AM Resin:将步骤(1)所得Fmoc‑Gly‑AM Resin加入固相合成管中,用25%哌啶/N,N‑二甲基甲酰胺脱Fmoc‑Gly‑AM Resin上的Fmoc保护基,,洗涤后得到B产物;取Fmoc‑D‑Arg‑OH,1‑羟基苯并三唑,N,N’‑二异丙基碳二亚胺加入到无水N,N‑二甲基甲酰胺中,在0~5℃活化后加入B产物,在25~35℃反应1~3 h后洗涤,得到Fmoc‑ D‑Arg‑Gly‑AM Resin;重复上述过程,依次偶联Fmoc‑Pro‑OH、Fmoc‑Cys(trt)‑OH、Fmoc‑Asn(trt)‑ OH、Fmoc‑Gln(trt)‑OH、Fmoc‑Phe‑OH、Fmoc‑Tyr(tBu)‑OH、Mpa(trt)‑OH,全部偶联完毕后,得到Mpa(trt)‑Tyr(tBu)‑Phe‑Gln(trt)‑Asn(trt)‑Cys(trt)‑Pro‑D‑ Arg‑Gly‑AM Resin;(3)裂解Mpa(trt)‑Tyr(tBu)‑Phe‑Gln(trt)‑Asn(trt)‑Cys(trt)‑Pro‑D‑Arg‑Gly‑AM Resin:将三氟乙酸与苯甲硫醚按照质量比94:6混合配制成裂解液,取裂解液,加入步骤(2)制备好的Mpa(trt)‑Tyr(tBu)‑Phe‑Gln(trt)‑Asn(trt)‑Cys(trt)‑Pro‑D ‑Arg‑Gly‑AM Resin中,裂解初始温度为0~5℃,保持0.5~1h,逐渐升到20~30℃,保持1~2h,得到Mpa‑Tyr‑Phe‑Gln‑Asn‑Cys‑Pro‑D‑Arg‑Gly‑NH3;(4)氧化成环:将步骤(3)制备得到的Mpa‑Tyr‑Phe‑Gln‑Asn‑Cys‑Pro‑D‑Arg‑Gly‑NH3加入适量纯化水中,配制成2g/L溶液,加入氧化剂双氧水1ml/L氧化液,反应1.5~2.0h,得到Mpa‑Cys成环的Mpa‑Tyr‑Phe‑Gln‑Asn‑Cys‑Pro‑D‑Arg‑Gly‑NH3;最后经过高效液相纯化和真空冻干得到高质量醋酸去氨加压素。 |