一种G蛋白偶联受体对化合物特异性的检测方法

摘要

本发明公开了一种G蛋白偶联受体对化合物特异性的检测方法，该方法包括以下步骤：制备重组HEK-293细胞悬液；在细胞悬液中加入腔肠素，得到重组细胞液；将重组细胞液分为对照组和待测组，在待测组中加入待测化合物溶液，在对照组中加入Hank's平衡盐溶液；若待测组发出的荧光信号强度高于对照组，具有显著差异，则说明该待测化合物对重组的HEK-293细胞中的GPCR有激活作用，反之则无；继续在待测组中加入GPCR相应的激动剂，检测其荧光信号；若检测到的荧光信号强度显著低于对照组，则说明该待测化合物对重组的HEK-293细胞中的GPCR有抑制作用，反之则无。本发明所提供的方法是一种灵活可变的检测模式，不但可以通过已知GPCR来检测未知化合物，而且可以通过已知化合物来反向检测与其特异性结合的GPCR。

主权项

一种重组的HEK‑293细胞的制备方法，其特征在于包括以下步骤：（1）将HEK‑293细胞分散于无血清培养基中，悬浮培养后得到HEK‑293细胞悬液；（2）将GPCR质粒、G蛋白突变体质粒与水母发光蛋白质粒按质量比3:1:1加入到无血清培养基中，得到GPCR质粒混合物；（3）将聚乙烯亚胺加入到无血清培养基中，得到PEI试剂；聚乙烯亚胺的质量是水母发光蛋白质粒质量的2~10倍；（4）将GPCR质粒混合物与PEI试剂混合均匀，室温静置5~15分钟，得到转染复合物；（5）将转染复合物加入到HEK‑293细胞悬液中，悬浮培养48~72小时，得到转染了三种质粒的重组HEK‑293细胞。