双歧杆菌原生质体的制备和转化方法

摘要

本发明属于微生物领域，提供了一种双歧杆菌原生质体的制备与转化方法，将长双杆菌接种到MRS琼脂培养基厌氧培养，转种于MRS液体培养基中培养后以2.5-3.5%的接种量转接于新鲜MRS液体培养基中，36-38℃，厌氧培养18-20h；收集菌体，重悬；加变溶菌素至终浓度为4.5-5.5mg/L，36-38℃酶解25-35分钟；重悬于SMM溶液中，得到双歧杆菌原生质体。该方法制备的原生质体生成率达到81％，其再生率达到48％，可以应用于双歧杆菌的转化，引入外源基因，构建双歧杆菌的工程菌株。

主权项

一种双歧杆菌原生质体的制备方法,其特征是，包括以下步骤:（1）将双歧杆菌接种到 MRS琼脂培养基上，厌氧培养；（2）从MRS琼脂培养基上挑单菌落，接种于 MRS液体培养基中，厌氧培养；（3）将上述培养后的MRS液体培养基以2.5－3.5%（v/v）的接种量转接于新鲜的MRS液体培养基中，36—38 ℃，厌氧培养18—20 h；离心收集菌体，用 SMM溶液重悬；（4）加变溶菌素至终浓度为4.5—5.5 mg/L，36‑38℃酶解，酶解时间为25－35分钟；酶解结束后重悬于SMM溶液中，得到双歧杆菌原生质体。