将单链蛋白质细胞内转化成它们的双链形式的方法

摘要

本说明书公开了包含含有双链环区域(所述双链环区域包含外源蛋白酶裂解位点)和可裂解位于双链环内的外源蛋白酶裂解位点的蛋白酶的单链蛋白质的表达构建体、包含这样的表达构建体的细胞组合物以及将单链蛋白质转化成其双链形式的细胞内方法。

主权项

一种将包含双链环区域的单链梭菌毒素转化成其双链形式的细胞内方法，所述方法包括步骤：a)将包含双重表达构建体的细胞在37℃下生长约3.5小时，所述双重表达构建体包含：i)编码单链梭菌毒素的开放阅读框，所述单链梭菌毒素包含酶促结构域、转位结构域、结合结构域和包含TEV蛋白酶裂解位点的双链环区域；和ii)编码TEV蛋白酶的开放阅读框；b)将所述细胞在22℃下生长约16至约18小时，其中在步骤(b)中的生长诱导所述单链梭菌毒素和TEV蛋白酶从所述双重表达构建体的表达；以及其中所述产生的TEV蛋白酶在位于双链环区域内的TEV蛋白酶裂解位点上裂解所述单链梭菌毒素，从而将所述单链梭菌毒素转化成其双链形式。