胶体金免疫层析法检测牛白血病抗体的试纸条及其制备方法

摘要

本发明涉及一种牛白血病病毒(BLV)囊膜糖蛋白gp51体外表达、分离纯化，和胶体金免疫层析法检测牛白血病抗体的试纸条及其制备方法。构建重组原核表达载体pET-32a-gp51，在大肠杆菌中诱导表达GP51重组蛋白，层析法纯化出His-gp51融合蛋白，将纯化的His-gp51融合蛋白和羊抗牛IgG点样于硝酸纤维膜上，分别作为捕获BLV抗体的检测线(T线)和捕获牛IgG的质控线(C线)，将胶体金标记的羊抗牛IgG(Fc)抗体吸附于玻璃纤维制成金标垫，从而组装成胶体金试纸条。根据检测线和质控线是否出现色带来确定血清中是否存在牛白血病抗体。

主权项

一种胶体金免疫层析法检测牛白血病抗体的试纸条的制备方法，包括牛白血病病毒囊膜糖蛋白gp51体外表达、分离纯化，其特征是：构建重组原核表达载体pET‑32a‑gp51，在大肠杆菌中诱导表达GP51重组蛋白；所述的GP51重组蛋白是由PCR法从BLV‑FLK DNA中成功扩增出牛白血病病毒囊膜糖蛋白gp51基因，构建了gp51原核表达载体，重组蛋白主要以不溶性包涵体在大肠杆菌中表达，表达的重组蛋白能被BLV阳性血清识别；经尿素变性和复性后，用Ni柱纯化法获得单一的His‑gp51融合蛋白条带，将纯化的His‑gp51融合蛋白和羊抗牛IgG点样于硝酸纤维膜上，分别作为捕获BLV抗体的检测线和捕获牛IgG的质控线，将胶体金标记的羊抗牛IgG‑Fc抗体吸附于玻璃纤维制成金标垫。