从鸡蛋清中提取核黄素结合蛋白的方法

摘要

本发明公开了一种从鸡蛋清中提取核黄素结合蛋白的方法，通过硫酸铵分级沉淀蛋白质，然后采用DEAE-Toyopearl650M阴离子交换层析进行分离。本发明获得的核黄素结合蛋白纯度高，回收率较好，通过分级沉淀，能去除蛋清中几乎所有的卵黏蛋白及部分卵白蛋白和卵转铁蛋白，降低了蛋清粘度，从而使后续的阴离子交换层析仅需采用一种层析填料即可获得高纯度的核黄素结合蛋白，无需更换填料，提高了填料的利用率，同时还简化了操作步骤，缩短了提取时间。

主权项

一种从鸡蛋清中提取核黄素结合蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）蛋清预处理：向蛋清稀释液中加入核黄素，使核黄素浓度为3‑3.5μg/g，得到饱和核黄素的蛋清稀释液；（2）提取核黄素结合蛋白：向饱和核黄素的蛋清稀释液中加入硫酸铵，使硫酸铵饱和度为55%，搅拌后离心，得到上清液，向上清液中继续添加硫酸铵，使硫酸铵饱和度为85%，搅拌后离心，得到沉淀，将沉淀用少量水溶解，透析后冷冻干燥，即为核黄素结合蛋白粗品；（3）分离纯化：将核黄素结合蛋白粗品用pH值为6.5、浓度为0.1mol/L的磷酸钠缓冲液配制成浓度为20mg/mL，用DEAE‑Toyopearl色谱柱分离，用含0.25mol/L 氯化钠的pH值为6.5、浓度为0.1mol/L的磷酸钠缓冲液洗脱，洗脱液用蒸馏水透析后冷冻干燥获得成品。