一种表达降钙素基因相关肽与鲑鱼降钙素融合基因的转基因生菜的制备方法

摘要

一种表达降钙素基因相关肽与鲑鱼降钙素融合基因的转基因生菜的制备方法，涉及一种转基因生菜的制备方法。是要解决目前降钙素基因相关肽与鲑鱼降钙素的来源有限且价格昂贵的问题。方法：一、将生菜种子浸泡、消毒、冲洗，培养得生菜无菌苗；二、取无菌苗子叶柄为外植体，平铺于不定芽诱导分化培养基中预培养；三、菌液的活化；四、取活化的菌液稀释，将外植体投入稀释后的菌液中浸泡，转入不定芽诱导分化培养基共培养；五、将外植体转入筛选分化培养基中培养，长出抗性再生苗，切下转接到生根培养基上培养，炼苗，水培，获得再生植株，鉴定为阳性的即为转基因生菜。本发明用于获得含sCT-hαCGRP融合基因的转基因生菜。

主权项

一种表达降钙素基因相关肽与鲑鱼降钙素融合基因的转基因生菜的制备方法，其特征在于表达降钙素基因相关肽与鲑鱼降钙素融合基因的转基因生菜的制备方法，按以下步骤进行：一、将生菜种子用蒸馏水浸泡2～3h，用体积浓度为8％次氯酸钠振荡消毒30min，然后用无菌水将消毒后的生菜种子冲洗5～6次，每次1min，吸干种子表面水分后摆放于1/2MS培养上，在25～27℃黑暗条件下培养1天，然后再进行光照培养，得生菜无菌苗；二、取7日龄的生菜无菌苗，超净工作台上剪取子叶柄0.5cm～1.0cm作为外植体，以正面朝上平铺于不定芽诱导分化培养基中进行预培养3天；三、将400μL降钙素基因相关肽与鲑鱼降钙素融合多肽转基因工程菌菌液加入到20mL含Kan 50mg/L、Rif 50mg/L的LB培养基中，在28℃、180rpm摇床培养24h后，按体积百分比2％的接种量接种到50mL LB培养基中，在28℃、180rpm摇床培养24h，获得活化的菌液；四、取活化后的菌液，用无菌蒸馏水稀释至OD600为0.1，将步骤二预培养后的外植体投入稀释后的菌液中，在恒温摇床上于28℃、180rpm浸泡5～30min，然后取出外植体吸干表面菌液，转入不定芽诱导分化培养基上，于21～23℃黑暗条件下共培养2d；五、将共培养2d的外植体转入筛选分化培养基中进行培养，每隔2周更换一次筛选分化培养基，培养至外植体上长出1.2cm以上的抗性再生苗，将1.2～2cm抗性再生苗切下转接到生根培养基上培养15～20d，炼苗，移栽入装有营养液的容器中进行水培，每周更换一次营养液，获得再生植株，对再生植株进行鉴定，获得的阳性植株即为转基因生菜。