发明名称 |
一种高纯度胰激肽原酶的制备工艺 |
摘要 |
本发明公开了一种高纯度胰激肽原酶的制备工艺,该制备工艺包括产品粗提纯、溶液配制、亲和柱层析、超滤脱盐、无菌过滤、冻干、包装等工序,所得到的产品纯度高达95%以上,效价增加70单位/mg以上,比活达到600单位/mg蛋白以上,可以做为注射剂的原料药进行应用。 |
申请公布号 |
CN102787111A |
申请公布日期 |
2012.11.21 |
申请号 |
CN201210258712.4 |
申请日期 |
2012.07.24 |
申请人 |
济南维尔康生化制药有限公司 |
发明人 |
刘盛儒;王增鑫;隗青;孙岩;王基伟;张梅村;迟创成 |
分类号 |
C12N9/64(2006.01)I |
主分类号 |
C12N9/64(2006.01)I |
代理机构 |
济南圣达知识产权代理有限公司 37221 |
代理人 |
彭成 |
主权项 |
一种高纯度胰激肽原酶的制备工艺,其特征在于:步骤如下:(1)粗提纯:①取胰脏粉或胰脏,加10~30倍量纯化水溶解提取,搅拌均匀后加入氯化钙至浓度为5~8%,调整pH为6.0~8.0,冷冻静置沉淀,离心收集沉淀;②将上述沉淀加入到事先配制好的2~4%的草酸盐溶液中,充分搅拌25~35分钟溶解,静置沉淀进行粗提纯,虹吸上清液得粗品液;(2)溶液配制:配制浓度为20~40%的无机盐平衡液,调整pH为4.0;配制浓度为20~40%的无机盐洗脱液,调整pH为6.0;(3)亲和柱层析:①平衡:将装有HS‑Sepharose亲和层析填料的层析柱,用上述配制的pH4.0、浓度20~40%的无机盐平衡液平衡,直至进出层析柱的溶液pH值与电导值相同时平衡完毕;②进样:调整上述制备的含胰激肽原酶的粗品液的pH值与无机盐平衡液一致,粗品液电导值等于平衡液电导值,根据每升填料最大亲和量3000万单位进行上样;③洗涤:用上述配制的pH4.0、浓度20~40%的无机盐平衡液冲洗一个柱体积;④洗脱:用上述配制的pH6.0、浓度20~40%的无机盐洗脱液冲洗柱子,同时用754分光光度计跟踪检测流出液在254nm处的吸收值,收集洗脱液,得收集液;(4)超滤脱盐:将上述收集液加注射用水超滤脱盐浓缩,当溶液电导值小于1000μs/cm时,停止加注射用水,继续浓缩,得浓缩液;(5)除菌:上述浓缩液用微孔滤膜进行除菌过滤,得无菌滤液;(6)冻干:加入辅料进行冻干,即得胰激肽原酶。 |
地址 |
250100 山东省济南市历城区工业北路303号 |