昆虫细胞系的建立方法

摘要

本发明提供一种昆虫细胞系的建立方法，经过虫体灭菌处理、清洗、剪碎、消化处理，得昆虫细胞悬液，加入改良培养基培养、传代，从而建立昆虫细胞系。通过本发明对多种昆虫组织细胞进行了原代及传代培养，取得了较好的培养效果，从而建立了多种昆虫细胞系，尤其使难于培养的鞘翅目及直翅目昆虫细胞也得到顺利培养，使这些难培养的昆虫细胞均能在体外稳定生长并建系成功。所培养的各种细胞中，大多发生增殖而进行传代培养，并且让细胞系度过了传代的危机，传代超过50代，并能稳定增殖，成为无限细胞系。从而为昆虫生理生化研究、生物反应器以及表达基因产物等，提供可靠技术支持和保障。

主权项

一种昆虫细胞系的建立方法，其特征在于经过下列步骤：1）用质量浓度为65～80%的酒精溶液，对昆虫虫体进行灭菌处理1～5min，用无菌水洗2～4次，用滤纸吸去水份；2）在显微镜下挑取步骤1）的昆虫放入PBS溶液进行常规清洗；3）将步骤2）的清洗昆虫转入装有质量浓度为0.10～0.25%的胰酶溶液的1.5～2ml离心管中，将昆虫剪碎至0.5～1mm3，消化处理5～10min，得昆虫细胞悬液；4）将步骤3）的细胞悬液吸入12.5～25cm2的培养瓶中，每瓶装入量为0.5～1ml，用改良培养基补足至4～5ml，所述每1000毫升改良培养基中含有下列组分：Grace培养基             40～50g海藻糖                  0.5～3g酵母抽提物               0.5～3g胎牛血清              100～200ml水                          余量；5）将步骤4）的装有细胞悬液及改良培养基的培养瓶，置于25～28℃的培养箱中，密闭无光照培养至细胞增殖并生长至铺满甁底；6）将步骤5）的铺满甁底的细胞进行常规悬浮并混匀后，以2:1或3:1的比例分瓶，并加入新鲜的改良培养基补充至4～5ml，继续在密闭无光照培养条件下培养至细胞增殖，如此传代培养至50代，使昆虫细胞系建立。