密码子优化方法

摘要

本发明涉及优化的编码蛋白质的多核苷酸序列在假单胞菌属宿主细菌中的异源表达。

主权项

一种生产重组蛋白质的方法，包括：为在荧光假单胞菌宿主细菌中异源表达对合成多核苷酸序列进行优化，其中所述合成多核苷酸包括编码蛋白质的核苷酸序列；将优化的合成多核苷酸序列连接到表达载体中；使用表达载体转化荧光假单胞菌宿主细菌；在适合蛋白质表达的适当培养基中培养转化的荧光假单胞菌宿主细菌；以及分离蛋白质，其中所述合成多核苷酸的优化包括步骤：通过用通常存在的密码子置换稀有密码子从合成多核苷酸序列中鉴定和修饰在荧光假单胞菌宿主细菌中不常使用的稀有密码子；从合成多核苷酸序列中鉴定和修饰推测的内部核糖体结合位点序列；通过消除五个或更多G核苷酸侧枝从合成多核苷酸序列中鉴定和修饰延伸的G或C核苷酸重复；鉴定和最小化合成多核苷酸序列的RBS和基因编码区中的mRNA二级结构；从该合成多核苷酸序列中鉴定和修饰不希望存在的酶限制性位点，以形成优化的合成多核苷酸序列。