利用基因组改组技术改良多拉菌素生产菌的方法

摘要

本发明公开了一种利用标记质粒制备发生原生质体融合的菌株的方法，所述方法具有易标记，易脱去标记的优点，可方便地用于进行基于基因改组技术的菌株育种和改良。所述方法操作简单、成本低、设备要求低，并且不伤害菌株自身的染色体。

主权项

一种菌株改良的方法，其特征在于，所述方法包括：(1)在适合原生质体融合的条件下，将第一亲本菌株与第二亲本菌株进行混合，形成第一亲本菌株与第二亲本菌株的混合物，其中，第一亲本菌株含有携带第一抗性标记的质粒，第二亲本菌株含有携带第二抗性标记的质粒，并且所述的第一抗性标记和第二抗性标记是不同的；且所述的第一亲本菌株和第二亲本菌株是bkdF基因和olmA1基因中断的除虫链霉菌；和(2)从所述混合物中选出耐受第一抗性标记和第二抗性标记的菌株，从而获得原生质体融合的菌株；(2’)去除原生质体融合的菌株中携带第一抗性标记的质粒和/或携带第二抗性标记的质粒；(3)从所获得的原生质体融合的菌株中，进一步选出性能改良的菌株；(4)以选出的性能改良的菌株作为第一亲本菌株和/或第二亲本菌株，重复步骤(1)‑(3)1‑1000次。