利用靶信号产生引物进行的靶检测

摘要

本发明涉及一种利用靶信号产生引物进行的靶检测。本发明通过在聚合酶链式反应（PCR）中使用的引物内引入双重相互作用性标记，使靶以及信号均得到扩增，并无需使用复杂的寡核苷酸，利用聚合酶链式反应（PCR）也可进行实时靶检测。本发明摆脱以往的实时聚合酶链式反应（PCR）方法的顽固的问题以及缺点。本发明仅利用标记引物成功地进行实时靶检测。并且，本发明不仅在液相还可以在固相中得到表示靶核酸序列存在的强信号。

主权项

一种利用靶信号产生引物从DNA或者核酸混合物中检测靶核酸序列的方法，其特征在于，包括以下的步骤：步骤（a），使上述靶核酸序列与上述靶信号产生引物进行杂交，上述靶信号产生引物包含：（i）杂交核苷酸序列，其与上述靶核酸序列互补，以及（ii）报道分子及猝灭分子；在上述靶信号产生引物不与靶核酸序列杂交的情况下，上述报道分子及上述猝灭分子在上述靶信号产生引物中三维地互相邻近，上述猝灭分子猝灭从上述报道分子发出的信号；在上述靶信号产生引物与靶核酸序列杂交的情况下，上述报道分子及上述猝灭分子在上述靶信号产生引物中三维地隔开，上述猝灭分子不猝灭从上述报道分子发出的信号，由此能够得到表示上述靶核酸序列存在的信号；步骤（b），在引物延长条件下，将步骤（a）的结果物与模板‑依赖性核酸聚合酶进行接触，在上述靶信号产生引物的3’‑末端发生3’‑延长反应；以及步骤（c），对表示上述靶核酸序列存在的信号进行检测，由此，上述信号表示在DNA或者核酸混合物中存在靶核酸序列。