一种简便兔肝金属硫蛋白的制备方法

摘要

本发明涉及金属硫蛋白的分离技术领域，具体涉及一种简便兔肝金属硫蛋白的制备方法。本发明的目的是要克服现有技术中存在的工序复杂、成本高的问题。本发明提供的一种简便的兔肝金属硫蛋白的制备方法，依次包括下述步骤：①诱导；②金属硫蛋白的提取；③纯化及脱盐：离心上清液经超滤后，直接进行阴离子交换层析分离、洗脱，用巯基试剂对流出液进行点滴检测，当巯基试剂显色时，立即连接SephadexG-50或SephadexG-25柱进行脱盐；④脱盐后的洗脱液进行冷冻干燥，得金属硫蛋白产品。本工艺用控制提取液的pH，直接进行层析分离，并将分离柱和脱盐柱串联使用，简化了工艺流程，操作简单易行，适合于工业化生产。

主权项

一种简便兔肝金属硫蛋白的制备方法，依次包括下述步骤：①诱导：采取每日腹腔皮下注射的方法给成体肉兔注射硫酸锌，注射次数为7次，注射剂量范围为10mg/kg‑250mg/kg硫酸锌，剂量呈依次递增形式，于第七次给药24h后处死动物，取出肝脏，保存于‑20℃，备用；②金属硫蛋白的提取：新鲜兔肝脏，生理盐水清理血迹后称重，加入2‑4倍量冰箱预冷的缓冲液研磨，迅速将研磨液加热至78～82℃，保持5‑10min，然后快速冷却至0～4℃，静置10‑30分钟，冷冻离心分离出上清液，调PH值至4.5～4.8，在0‑5℃下放置20‑40分钟再次分离出上清液，调pH至6.20‑6.40；③纯化及脱盐：将上述的离心上清液经超滤后，直接用琼脂基的DEAE系列树脂进行阴离子交换层析分离，用0.01M‑0.30M洗脱液洗脱，用巯基试剂对流出液进行点滴检测，当巯基试剂显色时，立即连接Sephadex G‑50或Sephadex G‑25柱进行脱盐；脱盐后的洗脱液进行冷冻干燥，得金属硫蛋白产品。