总RNA提取方法

摘要

本发明涉及一种优化了的植物材料总RNA提取的方法。总RNA提取方法，步骤为：（1）取新鲜植物材料在液氮条件下研磨成细粉状，转移到含有细胞裂解液的离心管中；（2）向步骤（1）中的离心管中加蛋白质-DNA沉淀溶液；（3）转移上清液到新的离心管中，加异丙醇；（4）弃上清液，用乙醇洗涤沉淀，空气干燥，加DEPC水稀释的DNA酶I溶液；（5）加DEPC水，盐酸胍溶液；（6）转上清液到新的离心管，加LiCl溶液；（7）离心，用乙醇洗涤，再经空气干燥后，溶解在DEPC水中低温保存。本发明的有益效果在于：1、操作步骤简单、方便。2、无需用常规有机溶剂（酚，氯仿）提取总RNA，从而防止了污染环境，同时对人体无害。

主权项

一种总RNA提取方法，其特征在于：步骤为：(1)取新鲜植物材料在液氮环境下充分研磨成细粉状，快速转移到含有细胞裂解液的离心管中，震荡5‑15秒后室温放置3‑7分钟；所述的细胞裂解液为2％(w/v)的SDS、68mmol/L的柠檬酸钠、132mmol/L的柠檬酸、1mmol/L的EDTA和0.5g/L的三盐酸亚精胺；(2)向步骤(1)中的离心管中加1/3细胞裂解液体积的蛋白质‑DNA沉淀溶液，上下颠倒混匀，4℃放置5‑15分钟后，离心5‑15分钟；所述的蛋白质‑DNA沉淀溶液为4mol/L的NaCl、16mmol/L的柠檬酸钠和32mmol/L的柠檬酸；(3)转移上清液到新的离心管中，加等体积异丙醇，上下颠倒离心管混匀，室温放置5‑15分钟，离心5‑15分钟；(4)弃上清液，用体积浓度70％‑80％乙醇洗涤沉淀，室温空气干燥3‑5分钟，加DEPC水稀释的DNA酶I溶液，37℃水浴10‑20分钟；(5)加DEPC水和盐酸胍溶液，上下颠倒混匀，离心3‑7分钟；(6)转上清液到新的离心管，加沉淀浓度为1.5‑2.5mol/L的LiCl溶液，上下颠倒混匀，‑20℃静置20‑40分钟或4℃静置10‑12小时；(7)离心20‑40分钟，用体积浓度70％‑80％乙醇洗涤沉淀，室温空气干燥3‑5分钟，溶解在DEPC水中低温保存。